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背景：抑癌基因负性调节细胞的生长、增殖及分化，如果出现基因缺失、突变等异常使其功能丧失，则会导致细胞恶性转化而发生肿瘤。ING1基因是新近发现的一种抑癌基因，在不同的肿瘤及细胞株中发现ING1基因有不同程度的缺失、突变以及表达异常，对肿瘤的发生发展起促进作用。p53基因是研究较为深入的一种抑癌基因，与p53功能相关的基因网络在细胞的发育、分化以及维持正常形态结构方面发挥了重要作用。抑癌基因ING1编码蛋白p33ING1b与野生型p53蛋白关系密切，p33ING1b蛋白可能是p53蛋白家族中的重要一员，两者共同参与调节许多细胞生命活动过程。研究p33ING1b基因在胰腺癌中的缺失突变及表达情况，以及与p53间的协同关系对阐明胰腺癌的发生机制具有指导意义。方法：构建含167例外分泌源性胰腺癌的组织芯片，用免疫组织化学方法观察167例癌、106例癌旁、11例良性病变、10例正常以及10例新鲜配对癌和癌旁组织中p33ING1b表达以及与p53蛋白表达的相关性；应用LOH观察23例胰腺癌中染色体ING1位点等位基因缺失情况；应用PCR-SSCP及DNA测序检测了p33ING1b基因在40例外分泌源性胰腺癌中的突变情况；应用RT-PCR半定量检测p33ING1bmRNA在9例癌及相应癌旁组织中的表达差异：将p33ING1bcDNA克隆入PCDNA3真核表达载体，并将其转染入人胰腺癌细胞株SW1990，观察了该细胞的生长速度及细胞凋亡情况；为进一步研究第二军医大学学位论文中文摘要P33INO’”与p53间的协同功能对胰腺癌细胞生物学行为的影响，同时转染p33IN“’b基因及野生型p53基因，观察联合共转染两基因及单转染基因组间细胞凋亡率及细胞周期G0/G、阻滞率的变化，western一blot比较转染后p33ING‘b与p53蛋白表达水平的差异。结果: 1.构建两张组织芯片，分别含171和190个位点，免疫组化显示胰腺癌组织中P33晰‘”及p53蛋白表达阳性率分别为77.9%和59.8%，两者阳性分布区域相同，均定位于细胞核，且p33ING，b与p53蛋白在胰腺癌组织中的表达呈正相关（P<0 .01）。 2.PcR一sscP及DNA测序结果表明P33哪，”基因在胰腺癌组织中没有大片段的插入或缺失，40例胰腺癌中有l例经SSCP检测出现异常迁移，DNA测序证实在INGlb基因外显子2区内第215位编码子存在TGc一Tcc错义突变;在癌旁组织中p33ING’b基因均未发现突变;INGlb基因的低突变率提示在胰腺癌中，突变不是引起 p33ING‘”抑癌基因功能丧失的主要原因。 3.LOH结果显示INGI位点附近存在杂合缺失，在23例胰腺癌中，D13S261，D13S1047，D13S1315和DS42490的缺失率分别为8.7%、21.7%、13.0%和26.1%，总的缺失率为60.9%，且离INGI位点越近缺失率越高，但仅有2（8.7%）例胰腺癌P33ING’b蛋白表达丧失。提示染色体的变化可能影响工NGI蛋白正常功能的发挥，但不会导致p33ING，b蛋白表达的缺失。 4.RT一PcR结果表明胰腺癌组织与癌旁组织中p33ING，bmRNA的表达存在差异，9例中6例p33INGI、RNA的表达下降，INGI转录或/和转录后加工过程中可能存在异常，此外在这9例胰腺癌中仅有1例蛋白不表达，提示转录或/和转录后修饰异常可能不影响p33INGlb蛋白表达。 5.胰腺癌细胞株sw1990在转染川3INO，“表达质粒和共转染p33创“‘”与p53后，细胞生长速度明显减慢，细胞凋亡率上升，S期变长，死亡细胞数目增多，western一blot显示两组中两者蛋白的表达均见升高。表明P33ING’”蛋白的过表达能够抑制癌细胞的生长并且阻止癌细胞的恶性转化;此外还可影响p53的表达，可能在调节细胞生长、诱导细胞转化方面两者协同发挥作用。结论: 1.P33ING’b功能性蛋白表达丧失和/或异常可能与肿瘤发生有关，而该基因的突第2页共87页变和／或缺失不是导致该基因功能丧失的主要原因。 2．13号染色体13p33习4区e’xl位点的杂合性缺失以及InRN转录和／或加工过程的异常可能是导致p33INO比基因功能缺失的原因。 3．p33”比蛋白的过表达能抑制癌细胞的生长且能阻止癌细胞的恶性转化，p33ING比真核质粒表达载体可能用作胰腺癌基因治疗的新手段。 4．p33ING“基因的表达可能需要的3基因的协同，两者共同作用于细胞的生长、凋亡和转化，保证机体发挥正常的功能，抑制肿瘤的发生。