利用RNAi及转基因技术抑制BmNPV增殖的研究

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RNAi,又称RNA干预或者RNA干涉,是dsRNA介导的特异性基因表达沉默现象。为了利用RNAi技术提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抗性,根据BmNPV复制必需基因.ie-1、lef-1设计其相应的dsRNA(21 bp),构建了带有je-1 daRNA表达盒的转基因载体piggyantiIE-neo和同时带有je-1 dsRNA表达盒、lef-1 dsRNA表达盒的转基因载体piggyantiIE-lef1—neo。研究结果显示:稳定转化piggyantiIE--neo BmN细胞,对BmNPV的增殖表现出抑制作用,稳定转化piggyantiIE-lef1-neo细胞对BmNPV增殖的抑制效果优于稳定转化piggyantiIE-neo细胞,但在病毒感染后期,均由于病毒恢复增殖导致RNAi的效果被掩盖。通过反向PCR分析了外源DNA片段插入基因组位点,结果显示:在转化细胞中,外源DNA可通过随机整合或按照piggyBac特定的转座位点TTAA插入细胞基因组。利用piggyantiIE-1efl-neo初步开展了家蚕转基因研究,获得了表现出荧光的蚕卵和蚕。
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