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蜂胶(propolis)是一种天然树脂混合物,主要来自一些植物的嫩芽和植物渗出液经由蜜蜂上颚腺加工得到。蜂胶富含多酚类物质,赋予其独特的生理和药理活性,具有抗菌、消炎、抗病毒、抗氧化、免疫调节、抗癌等多种生理功能。然而由于蜂胶水溶性低、气味浓烈、生物利用率低,在食品和药品中的应用受到限制。羧甲基壳聚糖(CMCS)作为一种水溶性壳聚糖衍生物,具有pH敏感性、生物粘附性、降解产物无毒、可控制释放等优点,被公认为是一种可实现生物活性物质靶向释放的聚合物。叶酸(FA)是一种低水溶性的维生素,可作为一种天然的疏水基团被接枝到亲水性的羧甲基壳聚糖糖链上形成具有两亲性的FA-CMCS偶联物,且叶酸作为一种靶向性基团,能够特异性识别肿瘤细胞表面过度表达的叶酸受体。本研究利用蜂胶在碱性条件下去质子化的原理,首次通过pH偏移法成功制备了荷载蜂胶的叶酸偶联羧甲基壳聚糖纳米粒子,整个制备过程避免了有机溶剂的加入且无需特殊设备,操作简便能耗低。主要研究结论如下:(1)在最优条件下制备得到的FA-CMCS纳米粒子外观呈球型,分布均匀不粘连。纳米粒子平均粒径大约为170 nm,zeta电位约为-30 mV。预先对FA-CMCS偶联物进行碱处理后形成的纳米粒子对蜂胶的包埋率和载药量分别达到73%和16.88%。傅里叶变换红外光谱(FTIR)分析表明:驱动荷载蜂胶的FA-CMCS纳米粒子形成的主要相互作用力是疏水相互作用力,静电相互作用力和氢键。(2)荷载蜂胶的FA-CMCS纳米粒子运载体系对蜂胶的包埋率高,环境稳定性好,能够减少蜂胶在胃部环境中的突释,使其在肠道环境中持续释放,尤其提高了蜂胶在结肠部位的释放量,FA-CMCS纳米粒子的装载大大提高了蜂胶的口服生物利用率。荷载蜂胶的FA-CMCS纳米粒子能有效提高蜂胶在水中的分散性,且包埋后蜂胶的体外抗氧化活性要显著高于分散在水中的游离蜂胶体外抗氧化活性。FA-CMCS纳米粒子是一种良好的蜂胶载体,在制备蜂胶口服液方面具有实际的应用前景。但由于羧甲基壳聚糖等电点在pH 5.0左右,而大多数加工食品体系的pH范围偏酸性,这限制了该体系在食品复配中的应用。为了解决这个问题,我们用ε-聚赖氨酸(EPL)对FA-CMCS纳米粒子进行复合。EPL是一种阳离子聚合多肽,它的等电点约为pH 9.0,最适pH为5.0-8.0左右,因此能够在弱酸性条件下通过静电相互作用吸附在FA-CMCS纳米粒子表面形成FA-CMCS-EPL复合纳米粒子。研究结果表明在最优条件下制备得到的纳米粒子粒径在148 nm左右,表面电位约为-27 mV。由傅里叶变换红外光谱得知氢键、疏水力和静电相互作用是驱动荷载蜂胶的FA-CMCS-EPL纳米粒子形成的主要相互作用力。复合ε-聚赖氨酸后制备得到的FA-CMCS-EPL复合纳米粒子能够在pH 4.0-7.0的弱酸环境条件下稳定,且该体系具有优良的热稳定性与可贮藏性,这使蜂胶在食品复配中的应用成为可能。我们的研究提供了一种具有创新性的基于pH偏移法构建两亲性羧甲基壳聚糖纳米粒子包埋运载疏水生物活性物质的思路,如荷载姜黄素、白藜芦醇、槲皮素等,以期提高其稳定性与生物利用率,从而拓展它们在食品、药品以及化妆品中的应用范围。