论文部分内容阅读
目的:利用点阵CO2激光联合脉冲染料激光来治疗兔耳的增生性瘢痕模型,对兔耳增生性瘢痕的形态学和组织学变化进行观察并分析,比较了CD31以及VEGF在不同治疗措施下表达的变化,对兔耳增生性瘢痕的转归进行了探讨。为临床上使用点阵CO2激光联合脉冲染料激光二者的协同作用能更加有效的抑制瘢痕增生和启动皮肤原位再生修复提供理论依据。方法:1、研究共选取新西兰大耳兔10只,分别将这10只大耳兔进行造模处理,得到兔耳增生性瘢痕模型80个,通过随机方式分组:对照组(A组)、点阵CO2激光组(B组)、脉冲染料激光组(C组)、联合激光组(D组),每组20个,以及正常皮肤组(E组)。2、点阵CO2激光治疗(Deep Fx:能量:15mJ,频率:300Hz,Shape:2,Size:5,Pulse:1,Density:5%):B、D两组予以点阵CO2激光进行治疗,A、C两组不进行处理。3、脉冲染料激光治疗(能量:9J/cm2,光斑:7mm,脉宽:3ms,动态冷却设备20ms喷射):C、D两组使用脉冲染料激光进行治疗,A、B两组不进行处理。4、标本的收集:对增生性瘢痕的大体形态变化进行观察,并在进行治疗之后的第3、7、14、21、28天对各模型瘢痕去切取小块的组织,一部分通过石蜡进行处理并保存,另一部分进行蛋白提取并检测。5、评价各组效果:对取材的增生性瘢痕组织通过HE染色法进行染色,然后观察其组织学改变;通过Masson染色观察增生性瘢痕内的胶原表达和血管分布的情况;免疫组化方法对瘢痕内CD31含量进行检测,观察其CD31表达变化情况;蛋白质免疫印迹检测瘢痕内VEGF蛋白表达情况。6、实验数据采用SPSS20.0软件包统计分析:数据均为计量资料,以均数±标准差的方式表示,比较各组间的差异采用单因素方差分析,采用LSD法进一步对两组间的差异进行比较,P<0.05为差异具有统计学意义。结果:1.大体观察:在造模之后28天里,各组兔耳创面都愈合完全并形成色红、触及质硬、突起的增生性瘢痕,治疗后A组瘢痕仍维持明显的增生状态;B、C两组瘢痕体积慢慢变小,质地、色泽均有好转,其中B组质地较C组改善明显,但色泽改善程度不如C组;D组增生性瘢痕先有增厚随后开始萎缩变薄,同时质地逐渐由硬变软,色泽也由深变淡。E组为正常皮肤,无变化。2.常规病理组织学观察:HE染色后镜下观察造模成功后的增生性瘢痕表皮较正常组增厚,真皮层明显增厚,镜下可见大量聚集的成纤维细胞,增生的真皮中可见扩张的毛细血管及炎性细胞浸润,胶原致密,粗大且排列紊乱,呈旋涡状排列分布,皮肤附属器消失。通过治疗后B、C、D三组增生性瘢痕均向正常皮肤有不同程度的转化和重塑,胶原排列趋向整齐,成纤维细胞数量减少;其中D组镜下结构与正常皮肤最为接近。A组改善不明显。3.Masson染色观察:镜下观察显示A组中可见胶原纤维被染成蓝色,排列致密且不规则,成纤维细胞大量分布,微血管生成增加,密度增大;经治疗后B、C、D三组增生性瘢痕中虽然也可见蓝染的胶原纤维,但与A组比较蓝染变浅且纤细,胶原排列疏散并趋于一致呈水平状,成纤维细胞数量减少,血管增生的情况也有不同程度的减轻。4.免疫组织化学染色观察:A组增生性瘢痕组织中可见血管内皮细胞内标志物CD31(即棕色颗粒物)表达增加。经治疗后B、C、D三组增生性瘢痕组织中CD31表达明显减少。并通过CD31标记的微血管密度(Micro-vessel Density,MVD)计数,统计出各组MVD值,将各实验组分别与A组进行比较,PA-B<0.05,PA-C<0.05,PA-D<0.05,差异均有统计学意义。5.蛋白质免疫印迹:经治疗后7天,B、C、D三组增生性瘢痕组织中VEGF表达明显减少,PB、PC、PD均小于0.05,差异有统计学意义。进一步对治疗28天后三组结果分别与A组比较,PA-B<0.05,PA-C<0.05,PA-D<0.01,差异有统计学意义,其中下降程度为D组>C组>B组。结论:1.对增生性瘢痕行点阵CO2激光联合脉冲染料激光治疗之后,能更加有效改善成纤维细胞数量、胶原形态、排列、密度;抑制血管的增生,减轻炎性细胞浸润以及降低了CD31和VEGF表达。点阵CO2激光联合脉冲染料激光治疗的疗效相比较单纯点阵CO2激光或者单纯脉冲染料激光更优。2.脉冲染料激光治疗瘢痕后可通过靶向其发育中的微脉管系统来减轻增生性瘢痕的形成。3、两种激光选择性光热作用于各自的靶基质(靶组织),针对性强,两种激光同期治疗具有协同作用,整体上有利于瘢痕的再生与修复。