论文部分内容阅读
本研究对我国北方三个城市(A市、B市和C市)的大型超市、大型农贸批发市场和个体熟食店采集的速冻熟制米面制品、烤肉制品、中式酱肉制品、中式凉拌菜、预制制品5大类共计900份中式菜肴样品中的致病菌进行监测和分离鉴定。结果大肠杆菌0157:H7未检出,单增李斯特菌检出21株。其中A市的单增菌检出率最高3.00%(9株);中式酱肉制品中单增菌的检出率为4.44%(8株),高于其他制品;熟食店中酱肉类和凉菜类的总检出率最高为8.33%(10株),这为食物中毒的监测以及污染源的追踪提供了依据。本实验对从样品中分离出的21株单增李斯特菌进行了多序列位点分型(MLST)和耐药性分析。结果显示,21株菌共分为12种ST型,其中ST5型7株(31.58%)、ST121型2株(10.53%)、ST9型3株(10.53%),其他9种ST型各1株;对21株单增李斯特菌进行抗药物敏感性试验,结果显示食品来源的单增李斯特菌对磺胺类、多肽类均呈现耐药性;其次对头孢类的耐药率为85.71%,对氨苄西林全部敏感,其余菌株对抗菌药物呈不同程度的耐药性;毒力因子检测结果显示21株单增李斯特菌对InlA,InlB,ActA,HlyA,PlcA,PlcB6个毒力基因全部呈现阳性,仅有InlJ呈现阴性。本实验还对大肠杆菌和单增李斯特菌进行免疫蛋白组学研究。选取大肠杆菌0157:H7和单增李斯特菌ATCC19111,免疫动物获得相对应的多克隆抗体;分别提取两株菌的总蛋白进行双向电泳,以制备的多抗作为一抗进行免疫印迹分析,利用PDquest软件匹配凝胶和免疫印迹膜完全重合的蛋白点,即有免疫反应的蛋白点,用MALDI-TOF/MS对具有免疫反应性的蛋白点进行质谱鉴定。初步鉴定了大肠杆菌0157:H7中的17种免疫反应蛋白,经过软件预测,包括1种外膜蛋白,16种细胞质蛋白。单增李斯特菌鉴定出了 16种免疫反应蛋白经过软件预测,包括2种膜蛋白,14种细胞质蛋白。本研究的开展,为大肠杆菌0157:H7和单增李斯特菌食物污染状况、特征分析、以及预防与控制相关食源性疾病提供了参考数据,并为筛选特异性蛋白以建立两种致病菌的免疫分析方法奠定了基础。