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[目的]1.通过对DVT大鼠静脉组织基因检测,利用Ncbi Gene生物信息平台,锁定早期与凝血因子Ⅴ、Ⅷ、Ⅹ、组织型纤溶酶原激活抑制物变化高度相关的上游基因,并在DVT大鼠和DVT患者血液中确定它们的表达变化。2.应用Genecard gene、Coagulation Pathway基因通路信息平台,分析上述部分关键基因与内皮细胞损伤及凝血增强之间的联系,发现内皮细胞线粒体膜通透性增加,导致内皮细胞损伤、分泌抗凝蛋白C减少,Ⅴ、Ⅷ、Ⅹ凝血因子生成增多、活性增强；应用Kegg、GEO、Fibrinolytic Pathway、Platelet Activation信号通路,分析上述部分关键基因与血小板聚集及纤溶活性抑制之间的联系,发现血小板膜上桥接血小板聚集的糖蛋白受体活性增强,血小板聚集增加,血小板释放纤溶酶原活化抑制物增多,纤溶酶原减少。3.通过研究发现TGF-β1等基因表达上调,其意义在于,在创伤性DVT中,以这些基因为线索,结合基因信息分析技术,能够快速锁定影响血栓复杂问题本质的关键角色,进而更有针对性的开展相关方面的机理深入研究工作,进一步清晰的阐明深静脉血栓形成的机制；同时,使寻找到新的、灵敏的可靠深静脉血栓诊断分子标志物变得更有科学依据和支撑。[材料和方法]1.构建大鼠DVT模型,将60只SD大鼠随机分为A组(对照组,n=10只)、B组(血栓形成前组,创伤后2.5小时,n=10只)、C组(血栓形成组,创伤后25小时)、D组(血栓不形成组,创伤后25小时)。在相应时间点解剖大鼠股静脉,观测血栓形成情况,获取相应状态的股静脉组织。采用Genechip Rat Genome2302.0基因芯片检测股静脉壁组织中差异表达的基因；进一步采用倍数变化分析法(Fold Change, FC)筛选出显著差异表达的基因；结合研究热点和最新Ncbi Gene和Gene Card数据库(2013年)、Pathway分析,锁定Serpine1等抗纤基因及相关调控基因(TGF-β1等)为研究重点。2.建立大鼠DVT模型,将60只大鼠随机分为A组(对照组,n=10只)、B组(血栓形成前组,创伤后2.5小时,n=10只)、C组(血栓形成组,创伤后25小时)、D组(血栓不形成组,创伤后25小时)。在相应时间点获取大鼠血液样本,定性及定量PCR检测上一步锁定的TGF-β1等目的基因的表达。3.通过最新Ncbi Gene和GeneCard数据库(2013年)获得大鼠与人群的TGF-β1、 Serpine1、vWF、PF4注释信息,将两者的基因序列代入BLAST中进行比较,明确其在大鼠与人类之间的同源性。4.参照《静脉血栓栓塞症预防的NICE指南》和《美国胸科医师协会抗栓与血栓预防临床实践指南-深静脉血栓形成的诊断》,统一本课题临床研究的DVT高危因素和诊断标准。收集2009年1月～2011年1月,在昆明医科大学第一附属医院骨科住院,有血栓高危因素的患者300例,性别、年龄不限,选取其中血栓形成者12例为血栓形成组(B组)、创伤后无血栓形成者15例为创伤组(C组),另外于健康体检人群收集10例为正常对照组(A组)。采集患者的静脉血液,采用PCR和real-time PCR检测TGF-β1、Serpine1、vWF、PF4基因的表达变化,并采用Pathway生物信息学分析,探讨血栓形成过程中TGF-β1、Serpine1、PF4和vWF的表达变化,以及在内皮细胞损伤、血小板聚集、凝血、抗纤中的作用。[结果]1.基因芯片检测大鼠DVT股静脉组织：差异表达基因2458个,其中上调1146个；下调1312个；锁定目的基因TGF-β1、Serpine1、vWF和PF4作为进一步研究对象。2.创伤后2.5小时,大鼠血中TGF-β1、Serpine1、vWF及PF4表达呈现上调。血栓形成后,以上基因表达显著上调,C组(血栓形成组)高于B组(血栓形成前组)及D组(血栓不形成组)(P<0.05)。3.大鼠与人BLAST对比：TGF-β1为89.4%,Serpine1为91.2%,vWF为86.9%,PF4为92.6%。同源性对比率均高于85%,说明TGF-β1等基因在大鼠与人类之间有较高同源性。4.临床患者血细胞中PCR检测结果：TGF-β1、Serpine1、vWF、PF4表达水平在B组(血栓形成组)中最高,C组(创伤组)次之,均高于A组(正常对照组)(P<0.05)；进一步的Pathway分析提示：TGF-β1为Serpine1的上游调控基因,Serpine1为vWF的上游调控基因,vWF可调控PF4分泌而活化血小板。[结论]1. TGF-β1、Serpine1、vWF、PF4与大鼠、人深静脉血栓形成均有密切联系。2. TGF-β1、Serpine1、vWF、PF4影响血栓形成的重要角色：血管内皮和血小板,导致凝血增强、抗纤减弱,促进血栓形成。3. TGF-β1、Serpine1、vWF、PF4在血栓将形成时表达明显升高,血栓形成后逐步升高,促进血栓形成；可以作为预测诊断深静脉血栓形成的分子标志物,其机理需进一步研究并验证其可靠性；同时,使下一步通过细胞系、动物水平DVT分子机制研究更有针对性。再扩大临床样本,验证在血栓形成前的表达变化,最终确定敏感的、可靠的DVT预测诊断的标志物。