MG132联合顺铂对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡及GST-π表达的影响

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目的观察蛋白酶体抑制剂MG132联合顺铂对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响,同时检测Hela细胞内GST-π的表达。方法:(1)倒置显微镜观察24小时时细胞形态学变化并摄片:对照组:DMSO处理;顺铂组:25μg/ml的顺铂加DMSO处理;MG132组:5μmol/L的MG132处理;MG132联合顺铂组:2.5μg/ml的顺铂加5μmol/L的MG132处理。(因MG132采用DMSO配制,所以对照组和顺铂组均加入同等浓度DMSO,各组比较时可排除DMSO对细胞的影响)(2)四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测Hela细胞抑制率:对照组1:含小牛血清的1640培养基处理24、48、72小时;顺铂组:分别采用1.0μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml的顺铂处理Hela细胞24、48、72小时;对照组2:DMSO处理24、48小时;MG132组:用5μmol/L蛋白酶体抑制剂MG132处理Hela细胞24、48小时;MG132联合顺铂组:用1.0μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml的顺铂分别加5μmol/L蛋白酶体抑制剂MG132处理Hela细胞24、48小时。(3)流式细胞术分析48小时时Hela细胞凋亡率及细胞周期:对照组:DMSO处理;顺铂组:2.5μg/ml的顺铂加DMSO处理;MG132组:5μmol/L的MG132处理;MG132联合顺铂组:2.5μg/ml的顺铂加5μmol/L的MG132处理。(4)免疫细胞化学SP法检测24小时时Hela细胞内GST-π的表达:对照组:DMSO处理;顺铂组:2.5μg/ml的顺铂加DMSO处理;MG132联合顺铂组:2.5μg/ml的顺铂加5μmol/L的MG132处理。结果(1)倒置显微镜观察细胞形态学变化:对照组细胞生长状态良好,细胞伸展、透亮,呈不规则对角形,细胞接触紧密;顺铂组细胞数目减少,胞浆内出现空泡,体积缩小,变圆,细胞间隙增大;MG132联合顺铂组细胞数目减少更加明显,视野内可见大量悬浮的凋亡细胞。(2)四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测Hela细胞抑制率:与对照组1活力比较,顺铂组(不同浓度)的抑制率分别为:(24h)8.79%±0.49%、16.56%±0.93%、20.13%±1.22%、29.82%±1.34%:(48h)19.55%±1.23%、30.76%±0.66%、40.11%±0.99%、65.02%±0.83%;(72h)25.27%±1.19%、40.02%±0.76%、54.63%±0.58%、80.19%±0.69%;随顺铂浓度升高Hela细胞抑制率增高,不同浓度顺铂组HeLa细胞增殖抑制率差异有统计学意义(P<0.05);随顺铂作用时间延长,HeLa细胞细胞增殖抑制率明显增高,且各组之间的差异有统计学意义(P<0.05),顺铂处理浓度与处理时间之间具有交互作用(P<0.05);与对照组2活力比较,MG132组的抑制率为:(24h)21.50%±1.01%,(48h)70.40%±2.17%;MG132联合顺铂组的抑制率分别为:(24h)63.21%±0.98%、66.98%±0.78%、70.21%±1.56%、87.19%±1.77%;(48h)78.88%±0.89%、86.69%±0.54%、92.76%±1.36%、95.28%±1.21%,MG132联合顺铂组对Hela细胞的增殖抑制率显著高于顺铂组和MG132组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)流式细胞术分析Hela细胞凋亡率及细胞周期:对照组为0.96%±0.25%;顺铂组为38.77%±1.17%;MG132组为12.15%±0.52%:MG132联合顺铂组为90.12%±0.95%。MG132与顺铂联合能有效诱导Hela细胞凋亡,其诱导的凋亡率显著高于对照组、顺铂组及MG132组,差异有统计学意义(P<0.05)。MG132联合顺铂组S期细胞百分数显著增加,各组细胞周期分布差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)免疫细胞化学SP法检测Hela细胞内GST-π的表达:MG132联合顺铂组与对照组、顺铂组比较,HeLa细胞中GST-π的表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.蛋白酶体抑制剂MG132能增强顺铂对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。2.蛋白酶体抑制剂MG132与顺铂联用能降低Hela细胞内GST-π的表达,这可能与MG132增加Hela细胞对顺铂的敏感性有关。
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