草地早熟禾PpGA20ox1基因的克隆及功能研究

来源 :北京林业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hbhhl2006
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GA20ox基因是赤霉素合成途径的关键基因,是一类与植株伸长生长相关的基因,广泛参与植物各个阶段的生长发育过程。本研究根据从本课题组的草地早熟禾转录组数据库中筛选出来的GA20ox基因片段,用RACE方法,以草地早熟禾Baron品种为实验材料,得到PpGA20ox1基因,并通过各种在线软件对其进行生物信息学分析。利用q-PCR技术对PpGA20ox1基因在各个组织中的表达情况进行了分析,结果显示,该基因主要在叶片中表达,在叶鞘和根中的表达量较低。利用q-PCR对赤霉素和赤霉素合成抑制剂烯效唑处理条件下PpGA20ox1基因的表达变化情况进行研究,结果表明,PpGA20ox1基因受到这两种物质的抑制,反映了该基因的负反馈调节机制。克隆了该基因的启动子,长度为988bp,分析结果表明:PpGA20ox基因的启动子上除了包含TATA-BOX和CAAT-BOX等基本的元件外,还包含茉莉酸甲酯、脱落酸等激素响应元件、光响应元件、逆境胁迫响应元件等。利用Gateway方法构建了基因的pAL-PpCGA20ox1-GFP植物表达载体,对基因进行亚细胞定位分析,结果表明该基因定位在细胞质和细胞核中。利用花序侵染法将pAL-PppGA20ox1-GFP载体转化拟南芥,筛选出两个转基因株系种植T2代植株进行生理指标检测。与野生型WT拟南芥相比,两个转基因株系的植株高度、叶片大小、株丛大小、叶绿素含量明显大于WT,花期提前,莲座形态、细胞形态发生变化。用草地早熟禾的种子培养出可供实验的愈伤组织,用基因枪法转化了草地早熟禾,得到了再生植株。该研究对PpGA20ox1基因的功能进行了大量研究,为草坪草育种奠定了一定分子基础。
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