背景：传统同种或异种生物瓣的表面缺乏宿主内皮细胞(EC)覆盖及基质缺乏间质细胞，是瓣叶钙化和原发性胶原退变的主要原因之一。因此，90年代以来，在瓣膜支架上种植宿主活性细胞以构建生物相容性好、具有抗钙化和自我修复能力的新型生物瓣是瓣膜外科研究的重要方向。目前应用的支架材料仍有不同的缺陷。生物材料脱细胞、鞣制后形成的纤维支架宿主细胞重建的研究，尚未见报道。本实验采用Courtman法脱去牛心包的细胞成分及可溶性蛋白，经戊二醛(Glutaraldehyde，GA)固定和2,3-丁二醇改性处理，最后依序种植肌成纤维细胞(MFC)和EC，研究其生物相容性及细胞生长特点，目的为在体外构建成含宿主细胞的组织工程生物瓣材料。 方法： (1)牛心包纤维支架试片的制备及分组：Ⅰ组(n=24，1×1cm~2/片)：新鲜牛心包经Courtman法脱细胞后用GA固定；Ⅱ组(n=24，1×1cm~2/片)：脱细胞及固定方法同Ⅰ组，随后用2,3-丁二醇改性。 (2)细胞提取、培养、种植：MFC和EC分别取自猪颈动脉，体外培养扩增；细胞种植：第1、2、3天每天MFC以1.0×10~5/cm~2的浓度种植于各组试片，第4～17天，体外继续培养已种植MFC的试片，第17天，再将EC以1.5×10~5/cm~2的浓度种植到各组试片上，第18～27天，继续培养已种植MFC及EC的试片。 博士学位论文 中文摘要 ＊）试片检测：台盼蓝染色计算活细胞数；HE染色作组织学观察；Vlll因子、a屯ctin检测分别鉴定EC、MIC；扫描电镜pEMX透射电镜（TEM）观察超微结构。 结果： 门）脱细胞效果：Courtman法基本脱去了牛心包的细胞成分，使其成为富含空隙的生物纤维支架。 仅）活细胞计数：细胞种植后第 4天，互组平均细胞数量＊．5士 0．03 X10’／cm’）显著少于＊组（2．9土 0刀4 XIO’／cm’）（p＜口对5）；细胞不植后第 7大，I组MFC计数为0，第20天，I组EC计数为小 而＊组细胞处于增殖状态：第 17天平均细胞数 （．4土 0．04 XIO’儿m勺显著多于第 4天（．9士 0．04 X10’／cm’）（＜0．05），第 27天平均细胞数 O．4土0．of X 10’／cm’）显著多于第 18天（4．5士0＊2X10’／cm）p＜O．05）。 m第27天HE染色及免疫组化鉴定显示：I组试片无细胞生长；11组试片一侧有2十层细胞生长，外层为EC，内层为MFC，MIC己迁移入纤维支架内层。 K）电镜观察：SEM显示：第 17大互组试片表面无细胞生长，11组表面也未见细胞，但胶原纤维之间的部分裂隙消失；第27天，I组试片表面无细胞生长，而＊组表面为完整融合的单层EC，部分EC拉长成梭形。TEM显示：第 17天 1组试片内部无细胞生长，而＊组有 MFC生长。 结论： ＊）生物材料牛心包经脱细胞、鞍制、改性处镇后形成的牛心包纤维支 g架具有良好的生物相容性。， 五二 博士学位论文 中文摘要 议）分别提取、分别培养、分层种植MFC和 EC是一种实用的生物纤维支架再细胞化组织工程技术，可在体外实现牛心包纤维支架的完全内皮化及部分间质细胞化。