南方红豆杉紫杉烷7β-羟基化酶基因全长序列的获得和分子进化分析

来源 :中国科学院武汉植物园 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wei71
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紫杉醇是一种从红豆杉植物中提取的抗癌药物,而紫杉烷7β-羟基化酶是紫杉醇合成途径的关键酶之一。本研究从南方红豆杉(Taxus wallichiana var.mairei)的新鲜嫩叶中提取基因组DNA作为模板,利用三组特异引物进行PCR扩增,然后经克隆测序得到紫杉烷7β-羟基化酶的基因全长。该基因编码区起始密码子为ATG,终止密码子为TGA,全长1692 bp;碱基组成为490 A(29.0%)、351C(20.7%)、362 G(21.4%)和489 T(28.9%)。将紫杉烷7β-羟基化酶基因全长序列与细胞色素P450基因家族的其它三个成员进行比对,发现它与紫杉烷2α-羟基化酶基因、紫杉烷10β-羟基化酶基因及紫杉烷13α-羟基化酶基因的一致性分别为74%、68%及76%。它们的外显子和内含子的连接区均具保守的GT-AG结构,内含子区的变异性明显高于外显子区。进一步以红豆杉属的13个紫杉烷羟基化酶摹因家族成员为对象,利用位点间可变ω(非同义替换率dN和同义替换率ds的比值)模型对该基因家族的适应性进化进行分析。位点模型分析显示不同位点之间所受的选择压力不同,但未检测到正向选择位点;虽然利用分支模型发现四个正选择分支,但应用分支一位点模型未能进一步检测到正选择位点。进化分析的研究结果表明:紫杉烷羟基化酶基因家族的少数分支处于正选择压力下(ω>1),但未检测到正选择位点;绝大部分位点受强烈的负选择作用(ω<1)。
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