单细胞凝胶电泳——彗星实验方法的建立、改良与应用

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单细胞凝胶电泳是一种在单细胞水平进行DNA损伤的检测方法,具有简便、灵敏、快捷、样品用量小等优点,广泛用于遗传毒性检测、环境毒性检测、分子流行病学和DNA损伤与修复等研究领域。本文建立了单细胞凝胶电泳技术,并对部分操作流程进行了改良,用“灌胶”法在载玻片上制胶,替代了传统的使用磨砂载玻片上“三明治”制胶,解决了彗星实验中常见的脱胶现象;在裂解后增加了水洗步骤,以消除裂解液中的高盐和去垢剂对后续实验操作的影响;采用直流稳压电源进行单细胞电泳,保证了实验结果的可重复性;对染色的条件进行了筛选,确定了使用EB作为细胞DNA的荧光染料;以CASP(免费)作为彗星图像的分析软件,建立了图像分析的方法。这些改良以及实验流程的优化或标准化,简化了操作程序,节省了时间,并使结果分析更加简便。
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