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研究目的: 初步探讨人参炔醇(PNN Panaxynol)对人胰腺癌细胞增殖作用,并进一步探讨其对人胰腺癌细胞转移的相关作用。从而为人参炔醇临床治疗胰腺癌提供进一步的研究依据。 研究方法: (1)将人胰腺癌细胞系Panc-1培养于DMEM/F12培养基中,待细胞达到稳定生长状态,进行实验分组:对照组和人参炔醇组,每组设置三个平行。 (2)采用MTT及流式细胞实验,筛选人参炔醇作用于Panc-1细胞的时间及浓度,并进一步观察人参炔醇对Panc-1细胞增殖抑制作用。 (3) Western Blot观察不同处理组中增殖相关蛋白的表达变化。 (4)致瘤实验分别收集对照组和人参炔醇处理的1×103个Panc-1细胞注入到15只裸鼠右及左侧腋下,三周后,对比观测肿瘤大小及生长形态。 (5)采用本实验组分选肿瘤干细胞方法,应用免疫荧光和Western Blot实验检测细胞干性相关蛋白CD133和Nestin的表达变化。 (6)采用MTT、流式细胞实验及AnnexⅤ-FITC法实验,进一步观察人参炔醇对胰腺癌干细胞增殖作用。 (7)划痕实验及Transwell实验观察人参炔醇对Panc-1细胞转移作用。 (8) Western Blot观察不同处理组中转移相关蛋白的表达变化。 研究结果: (1)将不同处理组Panc-1细胞置于光学显微镜下观察,可见对照组细胞边界清晰,形态呈梭形,而人参炔醇组细胞边缘模糊,形态欠规整,部分细胞变小变圆,细胞核凸显。 (2)MTT实验初步得出人参炔醇对抑制Panc-1细胞增殖并呈剂量依赖性抑制;流式细胞周期实验得出人参炔醇阻滞Panc-1细胞周期于G1期。 (3)Western Blot实验结果显示与对照组相比,人参炔醇组增殖相关蛋白表达明显下降。 (4)致瘤实验结果显示不同处理Panc-1细胞,三周后,裸鼠右侧可见明显肿瘤组织,而左侧腋下未见明显瘤体组织。 (5)免疫荧光及Western Blot结果显示Transwell下室细胞CD133和Nestin表达成强阳性,而Transwell上室细胞CD133和Nestin表达较弱。 (6) MTT及流式细胞周期实验得出人参炔醇对人胰腺癌干细胞增殖起抑制作用;而AnnexⅤ-FITC法实验得出人参炔醇明显促进对人胰腺癌非干细胞凋亡。 (7)不同处理组下划痕实验结果发现人参炔醇组迁移距离明显下降,细胞迁移抑制率明显增高;Transwell实验结果可见人参炔醇抑制Panc-1细胞迁移,且呈剂量依赖性特点,以在12h时作用效果最佳。 (8) Western Blot实验结果显示与对照组相比,人参炔醇组人参炔醇组N-Ca、Vimentin蛋白表达明显降低,而E-Ca蛋白表达明显增加。 结论: (1)人参炔醇通过抑制胰腺癌干细胞增殖,并促进胰腺癌非干细胞凋亡,进一步抑制人胰腺癌Panc-1细胞增殖。 (2)人参炔醇通过调控转移EMT相关蛋白表达抑制人胰腺癌Panc-1细胞转移。