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目的:通过甲基化特异性PCR(MSP)及RT-PCR探讨伯基特淋巴瘤(Burkitt Lymphomna,BL)细胞株Raji和人正常B淋巴细胞株(BCELL)细胞中PTEN甲基化及MicroRNA-155-5P(MiR-155-5p)表达水平。同时探讨慢病毒敲低Raji细胞中MiR-155-5p及甲基转移酶抑制剂对肿瘤细胞的生物学及对PTEN基因和蛋白的影响。并对MiR-155-5p与PTEN基因之间关系及其机制进行研究。从而探讨MiR-155-5p/PTEN调控轴能否成为BL治疗的候选靶点。方法:本课题分成三部分进行。第一部分:1.qRT-PCR探讨Raji细胞和BCELL细胞中MiR-155-5p mRNA表达差异,运用慢病毒(anti-mir-55-5p)感染Raji细胞。2.qRT-PCR验证慢病毒作用于Raji细胞前后其miR-155-5P mRNA表达变化。通过CCK8、克隆形成实验、细胞迁移实验检测慢病毒作用前后对Raji细胞增殖及细胞迁移的影响,通过流式细胞仪检测慢病毒作用前后对Raji凋亡及周期的变化情况。第二部分:1.qRT-PCR探讨磷酸酶及张力蛋白同源基因(Phosphatase and tension homolog,PTEN)在Raji及BCELL细胞中表达水平。2.甲基化PCR(MSP)及焦磷酸测序(BSP)探讨PTEN基因在伯基特淋巴瘤细胞株Raji细胞中甲基化水平。3.qRT-PCR探讨甲基转移酶抑制剂阿扎胞苷作用Raji细胞前后其DNMT1、3A、3B基因mRNA表达差异。4.流式细胞仪、CCK8探讨甲基转移酶抑制剂阿扎胞苷作用Raji细胞前后其对Raji细胞凋亡、增殖的影响。3.qRT-PCR及Western-Blot探讨阿扎胞苷作用Raji细胞前后其对PTEN基因mRNA及蛋白表影响。第三部分:1.qRT-PCR探讨阿扎胞苷作用前后MiR-155-5P表达水平。2.qRT-PCR探讨慢病毒干扰MiR-155-5P前后PTEN基因表达水平。3.构建PTEN 3-UTR区的野生型和突变型质粒并将两种质粒联合miR-155-5P mimic共转染到293T细胞内,通过qRT-PCR探讨野生型和突变型质粒PTEN基因mRNA的表达差异。4.WB探讨与PTEN/PI3K/AKT通路相关的分子蛋白激酶B(Protein kinase B,AKT)、磷酸化蛋白激酶B(Phosphatidylinositide Protein kinase B,P-AKT)蛋白在慢病毒作用于Raji细胞前后蛋白水平变化。结果:1.qRT-PCR结果显示Raji细胞较BCELL细胞表达更高的miR-155-5P。2.慢病毒干扰Raji细胞中miR-155-5P后qRT-PCR结果显示Raji细胞实验组(SI-KD)miR-155-5p mRNA表达量较对照组(SI-NC)显著降低。CCK8结果显示Raji细胞实验组在48h开始受到增殖抑制(p<0.05)。克隆形成实验结果显示Raji细胞实验组数量较对照组显著减少(p<0.05)。流式细胞仪检测Raji细胞周期结果显示两组细胞周期G0/G1期细胞比率无明显变化,但实验组G2/M期细胞比率较对照组明显提升(p<0.05)。流式细胞仪检测Raji细胞凋亡结果显示两组细胞均未发生明显凋亡(p>0.05)。3.qRT-PCR结果显示Raji细胞PTEN表达水平较BCELL低且MSP及BSP结果显示PTEN基因存在高度甲基化。4.qRT-PCR结果显示阿扎胞苷作用Raji细胞后可以降低Raji细胞甲基化水平。细胞凋亡结果显示阿扎胞苷作用Raji细胞后可以促进Raji细胞凋亡,CCK8结果显示阿扎胞苷作用Raji细胞后可以抑制Raji细胞生长。同时qRT-PCR结果显示阿扎胞苷作用后可以提高PTEN mRNA及蛋白水平且降低Mir-155-5p表达水平。同时可以促进Raji细胞凋亡和增殖受抑。5.慢病毒感染后qRT-PCR结果显示Raji细胞实验组PTEN mRNA较对照组高(p<0.05)。6.荧光素酶报告基因结果显示野生型PTEN-miR-155-5P荧光霉素相对活性显著低于PTEN野生型、PTEN突变型和PTEN突变型-miR-155-5P(P<0.05=。而PTEN野生型、PTEN突变型和PTEN突变型-miR-155-5P差异无统计学意义。5.WB结果显示慢病毒感染Raji细胞后其实验组P-AKT蛋白分子量较对照组降低(p<0.05)。但两者AKT蛋白分子量则无明显差异(p>0.05)。结论:1.Raji细胞PTEN基因存在高甲基化且高表达miR-155-5P。2.慢病毒感染BL细胞株Raji细胞miR-155-5P可以使细胞增殖受抑、细胞迁移能力下降,且阻滞细胞周期进程,但对细胞凋亡则无影响,且促进PTEN基因表达水平上升。3.甲基转移酶抑制剂阿扎胞苷可以逆转Raji细胞PTEN甲基化水平,促进Raji细胞生长受抑和促进其凋亡,且促进PTEN基因表达水平上升。4.阿扎胞苷可以降低miR-155-5P表达水平且miR-155-5p可以通过PI3K/AKT通路负调控PTEN基因的表达。Mir-155-5p通过PTEN/PI3K/AKT信号通路提高PTEN基因甲基化水平而促进肿瘤细胞的生长。