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目的:观察6,8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素(dFMAChR)抑制体外培养人肝癌Hep G2细胞的生长和诱导凋亡作用;用人肝癌Hep G2裸鼠移植瘤模型治疗实验评价dFMAChR在体抗肝癌的有效性;并初步探讨其抗肝癌作用机制,为寻找具有开发前景的肝癌治疗活性新化学实体提供理论和实验依据。方法: MTT比色法测定dFMAChR对体外培养人肝癌Hep G2细胞和人胚肝L-02细胞增殖的影响,评价其对人肝癌细胞作用选择性;平皿克隆形成法及软琼脂克隆形成法检测dFMAChR对体外培养Hep G2细胞的锚定依赖性及非锚定依赖性生长能力的影响; Hoechst染色荧光显微镜观察dFMAChR诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡的形态学改变; PI染色流式细胞计定量分析(FCM)法检测dFMAChR对Hep G2细胞诱导凋亡程度;DNA琼脂糖凝胶电泳检测dFMAChR诱导Hep G2细胞凋亡的典型DNA“梯形”条带;建立人肝癌Hep G2裸鼠移植瘤模型,评价dFMAChR在体的抗肝癌活性;HE染色光学显微镜下观察人肝癌移植瘤组织形态学变化;TUNEL法检测dFMAChR诱导人肝癌裸鼠移植瘤细胞凋亡作用;应用Western blot检测dFMAChR对HepG2细胞凋亡相关蛋白PPARγ、NF-κB、Bcl-2、Bax、Caspase-3表达和活性的影响。结果:MTT比色法结果显示,dFMAChR(3.0、10.0、30.0μM)和其先导化合物白杨素(ChR 30.0μM)及阳性对照药物氟尿嘧啶(5-FU 30.0μM)分别处理人肝癌Hep G2细胞48小时,其增殖相对抑制率分别为30.84%, 54.04%, 62.26% ,52.35%和61.48% ; dFMAChR的作用强于其先导化合物ChR。dFMAChR对正常人胚肝(L-02)细胞的毒性作用(IC50为449.43μM)远小于对人肝癌(HepG2)细胞的毒性(IC50为10.26μM),dFMAChR对人肝癌Hep G2细胞的抑制增殖作用选择指数达42.96。平皿克隆形成法结果显示,dFMAChR( 3.0、10.0、30.0μM)、ChR (30.0μM)及5-FU(10.0μM)对人肝癌HepG2细胞的集落抑制率分别为30.47%、54.77%、75.78%、59.37%和65.63%。dFMAChR的集落抑制率高于相应浓度先导化合物ChR ( P <0.05)。软琼脂克隆形成法结果显示, dFMAChR(3.0、10.0、30.0μM), ChR (30.0μM),5-FU(10.0μM)对人肝癌HepG2细胞的集落抑制率分别为19.49%,40.89 %,65.36%,41.54%和51.04%。dFMAChR集落抑制率明显高于相应浓度的先导化合物ChR( P <0.05)。Hoechst染色荧光显微镜观察发现dFMAChR(3.0、10.0、30.0μM)孵育48小时后,有部分HepG2细胞出现深染亮点的细胞核质,其中dFMAChR 30.0μM处理的细胞核染色质固缩最明显,同时伴有凋亡小体的形成。PI染色FCM分析显示,3.0μM,10.0μM,30.0μM的dFMAChR分别处理48小时,Hep G2细胞凋亡率分别为9.21%,16.0%,41.8%,呈浓度依赖性。其中dFMAChR30.0μM诱导凋亡率(41.8%)显著高于相同浓度ChR的凋亡率(20.8%),亦高于10.0μM的阳性药物5-FU的凋亡率(26.0%)。dFMAChR(10.0μM)分别作用48小时和72小时,人肝癌细胞基因DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型“梯形”DNA条带; PPARγ特异性阻断剂GW9662 (10.0μM)预孵育可消除dFMAChR(10.0μM)诱导的人肝癌基因DNA“梯形”条带。人肝癌裸鼠移植瘤模型治疗实验结果显示:dFMAChR对人肝癌移植瘤生长具有显著抑制作用,20、40、80mg/kg的dFMAChR对人肝癌皮下移植瘤的瘤重抑制率分别为40.17%,47.41%和66.81%。HE染色和TUNEL法检测发现,dFMAChR具有明显诱导人肝癌裸鼠移植瘤细胞凋亡作用。Western blot分析结果表明:经3.0,10.0,30.0μM的dFMAChR处理24h后, PPARγ蛋白表达分别上调10.3%,29.9%,46.4%;而NF-κB(p65)、Bcl-2蛋白表达分别下调5.1%,9.0%,14.6%和1.9%,5.6%,9.4%;Bax和caspase-3表达分别上调5.6%,9.2%,14.1%和9.3%,15.3%,17.3%。PPARγ阻断剂GW9662预孵育可明显拮抗dFMAChR诱导的人肝癌细胞PPARγ和caspase-3蛋白上调和NF-κB蛋白下调作用。证明dFMAChR诱导HepG2细胞凋亡作用至少部分依赖于PPARγ的活化。结论:1 dFMAChR具有抑制体外培养人肝癌细胞系HepG2细胞增殖作用,对人胚肝细胞系L-02细胞毒性小,其细胞毒作用具有相对选择性。2 dFMAChR抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,呈剂量依赖性。3 dFMAChR能有效诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。4 dFMAChR诱导HepG2细胞凋亡作用与其活化PPARγ,进而抑制NF-κB,下调Bcl-2蛋白表达水平,激活caspase-3有关。