在耳鼻咽喉科领域，有许多因软骨缺损而导致的畸形或功能障碍，临床上多以自体移植，异体移植以及人工材料来修复重建。而自体移植多伴有来源受限，供体损伤以及形态不匹配等问题；异体及人工材料移植则有免疫排斥反应，异物反应，感染等问题。因此寻找新的途径解决上述问题成为医学工作者的棘手而重要的任务。组织工程技术为解决上述问题提供了新的途径。组织工程学是一门把生物学和工程学相结合的学科。它的基本思想是以少量的组织细胞经体外培养扩增后种植于可降解生物支架材料上，回植于动物体内形成有功能的器官或组织。目前组织工程研究主要集中于三方面：种子细胞，生物支架材料以及工程化组织的形成。本研究主要探讨在有免疫力的动物体内构建同种异体工程化软骨的可行性，并初步验证本实验使用的生物材料聚氧化乙烯丙烯凝胶在组织工程研究中应用的可行性。 材料与方法 无菌条件下切取新生兔关节软骨，并剪碎成约2mm×2mm×2mm大小的碎片，以磷酸盐缓冲浪冲洗两遍，用0.3％Ⅱ型胶原酶于37℃恒温消化8-12小时，100目尼龙网过滤收集软 第四军医大学硕士学位论文骨细胞，台盼蓝染色记数。将软骨细胞和25％聚氧化乙烯丙烯凝胶混合，制成细胞浓度为 5 XIO’／ml的细胞悬液，并移植于兔皮下，并以边注射边后退的方法做条索壮注射，以了解可否形成预定棒状软骨。同时设立单独注射细胞和生物材料两个对照组。分别于4周，6周，8周及12周取材行大体观察，石蜡包埋切片行HE染色，Saffranin O染色和 Masson，s染色以了解软骨形成情况。 会 果 实验组及对照组均未见明显的全身或局部的兔疫排斥反应表现。实验组2周后即可于皮下触及新主结节；4周取材见新主结节呈白色，表面有轻度纤维包裹，质韧，6周以后其表面纤维包裹增厚，去除包裹后见软骨显磁白色，质较硬，接近正常软骨；而8周和 12周所形成的软骨无论是质地还是弹性等方面均与正常软骨相似。以注射的方式构建的棒状软骨形态良好。4周时切片HE染色见己有部分较小的陷窝形成，但软骨细胞形态尚不十分典型，软骨周边有部分淋巴细胞浸润，聚氧化乙烯丙烯凝胶尚未完全吸收，Safranin O染色见有糖胺多糖（GA）分泌，Masson七三色染色见已有胶原形成；6周以后切片染色见软骨陷窝明显，细胞形态基本正常，周边淋巴细胞浸润比4周时减少，聚氧化乙烯丙烯凝胶己基本吸收，GAG 第四军医大学硕士学位论文的分泌和胶原形成的量均较4周时多；8周及12周后淋巴细胞浸润和纤维包裹情况比第4周并无增多增厚，而镜下形态除细胞排列无序外其余与正常软骨相同。对照组则无软骨形成。 会 论 一、本实验使用的生物材料具有良好的生物相容性，可降解性，无细胞毒，是较理想的组织工程生物材料。 二、应用本实验的方法可在有免疫力的动物体内构建同种异体工程化软骨，并可通过注射的方法进行简单的塑型，这为某些临床治疗或手术，如鞍鼻的整形，喉功能的重建等提供了一种可能的微创而可塑型的手段。