热响应性微纳米颗粒作为药物载体的细胞内吞及可控释放

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细胞对生物材料的内吞是生物材料在生物医药领域得以广泛应用的重要前提。我们的工作主要是设计和制备了一种新型的、具有温度响应性的聚异丙基丙烯酰胺(pNIPAM)/脂质杂化颗粒,采用实验与模拟相结合的方法,从分子层次上重点研究了颗粒表面的化学性质,包括亲/疏水性质以及表面磷脂分子修饰的性质,对其在生物膜表面吸附以及跨膜过程的影响。之后,我们以二氯硅酞菁分子作为药物模型,研究了pNIPAM/脂质杂化颗粒作为药物载体,对二氯硅酞菁分子的可控搭载与热响应可控释放,以及搭载酞菁的杂化颗粒进入癌细胞并实现光动力学治疗的效果。  本论文研究的主要内容如下:  (1)研究了聚异丙基丙烯酰胺(pNIPAM)/脂质杂化颗粒与一种典型的生物膜简化模型-单层巨囊泡(GUVs)的相互作用。我们首先制备了形态规则,尺寸均匀的单层巨囊泡;以pNIPAM水凝胶颗粒为基础、利用溶剂转化法制备了pNIPAM/脂质杂化颗粒,并对原始 pNIPAM颗粒及 pNIPAM/脂质杂化颗粒(称为 Lipogel颗粒)的结构和热响应性质分别进行了表征。在低于 pNIPAM相转变温度的情况下(例如室温的22℃),Lipogel颗粒呈现出三层结构,包括具有核壳双层结构的微球和周围一层磷脂聚集体层;而温度高于 pNIPAM的相转变温度时(例如生物体的温度37℃),pNIPAM链的疏水基团暴露,Lipogel颗粒坍缩成一个体积缩小的杂合球。在此基础上,我们通过改变温度有效调控Lipogel颗粒的表面亲疏水性质,分别研究了22℃和37℃下Lipogel颗粒与巨囊泡的相互作用。实验发现,在常温下纯pNIPAM颗粒与巨囊泡不发生吸附,但是修饰了磷脂分子的Lipogel颗粒会吸附在巨囊泡表面;温度升高至37℃后,Lipogel颗粒会进一步跨膜进入巨囊泡内部。我们用计算机模拟有效验证和解释了这一实验现象。最后,我们以水溶性罗丹明染料作为模型药物分子,实现了Lipogel颗粒搭载药物进入巨囊泡和细胞的过程。这一工作从分子层次上解释了材料的表面化学性质对其与生物膜相互作用过程的影响,对我们了解细胞内吞的机制有重要意义。  (2)大多数种类的药物不具有水溶性,在水溶液中会发生会聚进而影响其效果和应用。为了解决这一问题,在这一部分工作中,我们重点研究 pNIPAM/脂质杂化颗粒(即Lipogel颗粒)作为药物载体,搭载一种典型的疏水性光敏药物--二氯硅酞菁(简称酞菁),并实现可控搭载、热响应释放及进入细胞实现光动力学治疗的应用效果。我们首先利用激光共聚焦荧光显微镜、紫外-可见吸收光谱、荧光光谱、红外光谱分析、扫描电子显微镜等多种手段证明了Lipogel颗粒对酞菁分子的有效搭载。之后我们证明,通过控制药物孵化时间和调节磷脂分子的相对浓度等手段,可以有效控制药物的搭载效率;并且通过改变温度可以实现药物的可控释放。最后,我们证明了搭载酞菁分子的Lipogel颗粒能够进入HeLa癌细胞,并且可以有效实现光动力学治疗的效果。实验结果充分证明了该种Lipogel杂化颗粒在疏水药物搭载方面的应用价值。
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