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植物前体mRNA的剪接调控在植物响应高温胁迫的反应机制中起重要作用,本人所在实验室在前期实验研究中通过LUC筛选系统筛到四个与高温胁迫相关的拟南芥突变体,分别为hl1401、hl307、hl761和hl111,除HL111还不确定外,另三种发现可能与剪接相关,为了研究这些剪接因子的作用机理,我们尝试用酵母双杂交系统筛选拟南芥cDNA表达文库中与其互作的蛋白,并已成功获得这些蛋白的信息。经一系列筛选验证剔除假阳性,共发现18种蛋白在酵母中与HL1401有相互作用,其中约13种核蛋白,其它的主要定位于细胞质和叶绿体等细胞器,它们功能各异,有的是解旋酶,有的与糖酵解相关,还有些能结合DNA和蛋白质等。总的来说,这个结果符合我们预期,因为HL1401与GFP融合蛋白在烟草中的瞬时表达显示H1401在细胞核中,所以,从定位上分析,许多基因很可能在植物体内与HL1401相互作用,至于功能方面还待进一步研究探讨。对于HL307来说,共发现16种蛋白,约8种核蛋白,其它的主要定位在细胞质和核糖体等细胞器。功能上说,也有一些蛋白能结合DNA,还有些具解旋酶的功能等。值得欣喜的是,在筛选结果中多次出现的一种核蛋白恰好是与胁迫反应相关的剪接因子,而从HL307的研究中也发现它与剪接相关,同时定位在细胞核,所以这个基因与HL307相互作用的可能性较高。另外,HL307与GFP融合蛋白的定位还发现它在细胞质中也有不均匀分布,所以,从定位上分析,其余一些基因也很有可能在体内与HL307相互作用。对于HL761来说,共发现有23种蛋白,约15种核蛋白,其它的主要定位在细胞质和叶绿体,同样的,其中也有许多蛋白能结合DNA和蛋白质,还有些蛋白具转录因子功能等。总体上说,这个结果也符合我们预期,因为HL761的定位也在细胞核,所以,从定位结果分析,这些结果也是很可靠的。对于HL1ll来说,共发现有18种蛋白,仅有2种核蛋白,而占最大比例的是叶绿体蛋白,其余的主要定位在细胞质和线粒体,还有个别蛋白未知。从功能上说,也有许多蛋白能结合DNA和蛋白质,有些蛋白是水解酶等。当然,目前从功能上还不能判断什么,但遗憾的是,从定位上分析,这个结果却与预期不符,因为HL111蛋白的定位在细胞核,而筛到的这些蛋白绝大部分定位在核外,只有个别的在核内。但我们通过后期实验发现HL111在叶绿体中似乎也有定位,这说明我们的筛库结果应该也是可靠的。综上所述：本实验利用文库筛选在酵母中与目的基因有互作的蛋白,继而再通过后续的体内体外实验的验证探究能够为我们进一步研究这些基因在高温胁迫下的作用机理打下基础。