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原发性肝癌是世界范围内第六大常见和第四大致死性癌症,也是我国第五大常见致死性疾病。肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)在原发性肝癌中占比75%-85%,全球50%以上的HCC发生在我国。由于早期HCC缺乏症状,缺乏诊断的生物标志物和其它检测方法,大多数病例发现已是晚期以及晚期患者治疗选择有限,所以HCC患者的死亡率高。HCC晚期患者预后不佳,生存期较短,因此,迫切需要了解HCC发展的分子机制,为HCC的治疗提出新的思路。文献报道,lncRNA-LALR1能够促进肝脏再生,但在HCC中的作用尚不清楚。我们发现lncRNA-LALR1在HCC中高表达,提示lncRNA-LALR1可能促进HCC进展,但lncRNA-LALR1在HCC的生物学作用及相关分子机制尚不明确。本文将从三个部分来探讨lncRNA-LALR1对HCC细胞增殖、侵袭等生物学功能的影响,并阐述其相关的分子机制。第一部分LncRNA-LALR1在HCC中的表达及其与临床病理参数间关系的研究目的:在临床组织样本中检测lncRNA-LALR1的表达,探讨lncRNA-LALR1与临床病理参数间的关系。方法:在重庆医科大学附属第二医院收集46例新鲜HCC组织及其对应的癌旁组织,利用qRT-PCR实验检测lncRNA-LALR1在46对临床组织样本中的表达。采用配对t检验分析lncRNA-LALR1在HCC癌与癌旁组织中的相对表达水平,卡方检验分析其表达与患者临床病理参数间的关系。结果:(1)在46例HCC组织及对应的癌旁组织中发现,lncRNALALR1在HCC癌组织中的表达水平显著高于对应的癌旁组织;(2)lncRNA-LALR1的表达水平与患者的TNM分期,肿瘤分化以及远处转移呈显著正性相关。结论:lncRNA-LALR1在HCC组织中高表达,且与患者的TNM分期,肿瘤分化以及远处转移呈正相关,提示lncRNA-LALR1可能促进HCC进展。第二部分LncRNA-LALR1对HCC细胞的生长与侵袭的作用研究目的:探讨lncRNA-LALR1对HCC细胞增殖、克隆形成以及侵袭等生物学行为的影响。方法:qRT-PCR和FISH实验检测lncRNA-LALR1在Huh7,HepG2,Sk-Hep1,SMMC-7721,PLC/PRF/5,和MHCC-97H等六种HCC细胞系中的表达;利用lncRNA-LALR1敲低慢病毒感染HCC细胞,qRTPCR和FISH实验鉴定敲低lncRNA-LALR1稳定转染细胞株;通过CCK-8、克隆形成、流式细胞术、Western Blot实验、Transwell侵袭实验检测敲低lncRNA-LALR1对HCC细胞增殖、生长、细胞凋亡、细胞周期以及侵袭的影响;利用裸鼠皮下成瘤实验检测敲低lncRNALALR1在体内对HCC细胞生长的影响。结果:(1)lncRNA-LALR1在SMMC-7721和HepG2细胞中表达高于其他HCC细胞系;(2)lncRNA-LALR1位于细胞核和细胞质,尤其在核仁表达明显;(3)敲低lncRNA-LALR1后在体外显著降低HCC细胞增殖、生长及侵袭能力;(4)敲低lncRNA-LALR1后裸鼠皮下瘤的生长受到抑制。结论:LncRNA-LALR1同时位于细胞质以及细胞核,尤其是核仁部分;敲低lncRNA-LALR1显著降低HCC细胞增殖、生长和侵袭,说明lncRNA-LALR1可促进HCC的恶性表型。第三部分LncRNA-LALR1通过上调SNORD72促进HCC细胞生长与侵袭的机制研究目的:探讨lncRNA-LALR1促进HCC细胞生长和侵袭的分子机制。方法:转录组测序用来分析敲低lncRNA-LALR1后的基因表达谱变化;qRT-PCR实验验证敲低lncRNA-LALR1后的基因表达变化;GO富集分析lncRNA-LALR1参与的生物过程,所处的细胞位置,发挥的分子功能;KEGG分析敲低lncRNA-LALR1后信号通路变化;qRT-PCR、Western Blot和FISH实验检测lncRNA-LALR1对SNORD72和ID2表达的影响;RNA-RNA pulldown实验检测lncRNA-LALR1与SNORD72和ID2的结合情况;放线菌素D mRNA稳定性实验检测lncRNALALR1对SNORD72和ID2 mRNA稳定性的影响;CCK-8、克隆形成、Transwell小室侵袭实验检测SNORD72对HCC细胞增殖,生长和侵袭的影响;SNORD72回复实验检测SNORD72对lncRNA-LALR1作用的影响。结果:(1)敲低lncRNA-LALR1后,有540个基因的表达上调,145个基因的表达下调,qRT-PCR验证表明SNORD72和ID2的变化最为明显;(2)GO分析显示lncRNA-LALR1明显与细胞核相关成分以及相关过程有关;(3)KEGG分析显示lncRNA-LALR1与P53、NF-κB和MAPK信号通路等相关;(4)qRT-PCR、Western Blot和FISH实验表明敲低lncRNA-LALR1后显著下调SNORD72和ID2的表达;(5)RNA-RNA pulldown实验表明lncRNA-LALR1与SNORD72和ID2mRNA均存在结合;(6)放线菌素D mRNA稳定性实验表明敲低lncRNA-LALR1能够降低ID2 mRNA稳定性,但对SNORD72稳定性却没有显著影响;(7)SNORD72在HCC中高表达且显著促进HCC细胞增殖、克隆形成以及侵袭能力;(8)SNORD72上调ID2表达且过表达SNORD72明显增加ID2 mRNA的稳定性;(9)在敲低lncRNALALR1细胞中过表达SNORD72能够减轻lncRNA-LALR1敲低引起的HCC细胞增殖、克隆形成和侵袭能力的下调。结论:LncRNA-LALR1通过上调SNORD72,促进ID2mRNA稳定性,进而促进HCC细胞的生长与侵袭。