淫羊藿苷对兔阴蒂海绵体平滑肌细胞NO生成及NOS活性的影响

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目的:探讨新西兰白兔阴蒂海绵体平滑肌细胞的体外培养方法及生物学特性;淫羊藿苷对体外培养的阴蒂海绵体平滑肌细胞一氧化氮(NO)生成、一氧化氮合酶(NOS)活性的作用效果以及对海绵体平滑肌细胞生长的影响。 方法:取兔阴蒂海绵体采用酶消化法进行平滑肌细胞体外原代培养;倒置显微镜下观察培养细胞的生长状况、形态特征及贴壁过程;计数法测定细胞贴壁率;用MTT法描绘培养细胞的生长曲线;利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测平滑肌细胞特征性标记物α-actin表达及利用免疫细胞化学染色法检测α-actin进行细胞鉴定。利用硝酸还原酶法NO生成试剂盒及NOS试剂盒测定不同浓度淫羊藿苷对体外培养的阴蒂海绵体平滑肌细胞NO生成及NOS活性的影响。利用MTT方法检测不同浓度淫羊藿苷对兔阴蒂海绵体平滑肌细胞生长增殖的影响。 结果:培养的兔阴蒂海绵体平滑肌细胞具有典型的平滑肌细胞形态特征,为梭形,呈长轴平行排列,具有明显的方向性;体外贴壁快,生长迅速,体外培养的阴蒂海绵体平滑肌细胞在合适的传代条件和比例下能够生存并保持其稳定的生物学特性。淫羊藿苷浓度依赖性地增强兔阴蒂海绵体平滑肌细胞NOS活性并增加NO生成(P<0.01),且被NOS抑制剂L-硝基精氨酸(LNNA)所抑制(P<0.01);并且在一定浓度范围内促进兔阴蒂海绵体平滑肌细胞的生长。 结论:体外培养的兔阴蒂海绵体平滑肌细胞模型可用于进一步研究阴蒂组织细胞学、分子生物学机制以及受体介导的平滑肌收缩信号转导机制、药理学作用等;淫羊藿苷可能通过增强NOS活性而提高阴蒂海绵体平滑肌细胞NO生成,增强性刺激下阴蒂海绵体平滑肌的松弛作用而增强阴蒂胀大勃起功能;并且对阴蒂海绵体平滑肌细胞的生长增殖有促进作用。
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