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目的在体内实验部分,拟在STZ诱导的糖尿病大鼠中进行VF28对视网膜损伤的短期(6周)和长期(12周)保护作用研究;在体外实验部分,拟在高糖和VEGF+FGF因子刺激下的视网膜血管内皮细胞中进行VF28的保护作用研究。方法体内实验中,大鼠静脉注射STZ后,对体重,血糖,饮水量等生理指标进行定期监测。在造模后1周、4周(短期实验);5周和9周(长期试验),分别经玻璃体腔注射低、中、高剂量VF28,以及VEGF trap和FGF trap。在造模后第6周,检测视网膜微血管细胞凋亡,视网膜中胶质细胞标志基因GFAP的表达,并用伊文思蓝实验检测血-视网膜渗漏状况,以及透射电镜检测视网膜微血管和神经的超微结构变化。在长期试验中,造模后第12周,FITC-右旋糖酐球后注射行眼底荧光血管造影,伊文思蓝实验检测血-视网膜渗漏状况,胰酶消化视网膜后行PAS染色检测无细胞毛细血管结构,以及透射电镜检测视网膜毛细血管基底膜增厚。体外实验中,将猴视网膜血管内皮细胞RF/6A置于33 mM高糖培养基中,分别用实时PCR和ELISA检测12、24、36、48 h后VEGF和FGF基因和蛋白的表达状况。在高糖刺激24、48、72 h后,VEGF+FGF因子刺激48 h小时后,用CCK法检测不同剂量的VF28对RF/6A细胞增殖的影响。选出的最佳VF28剂量后,将等浓度的VF28,VEGF trap,FGF trap药物(均为0.08 μg/μl)加入到培养基中,分别用细胞移行和管腔形成实验检测这些药物对高糖和因子刺激下的RF/6A细胞的作用。结果体内短期实验中,STZ诱导的糖尿病大鼠表现出以高血糖为典型症状的Ⅰ型糖尿病的代谢综合症。两次经玻璃体腔注射高剂量VF28(9 μg),显著减少糖尿病视网膜血管网中凋亡细胞的数量,显著降低血-视网膜屏障的渗漏,明显抑制视网膜胶质细胞反应性增生,以及改善神经视网膜和视网膜血管的超微结构。长期实验中,球后注射高分子量FITC-右旋糖酐只可标记糖尿病大鼠视网膜血管网,正常对照组和其它各治疗组的视网膜血管网均不可标记,这一结果暗示各治疗组的血-视网膜屏障渗漏均有所改善。与此结果一致的是,在伊文思蓝实验中,VF28各剂量组,VEGF trap以及FGF trap均可改善糖尿病大鼠视网膜屏障渗漏的现象。另外,VF28,VEGF trap,和FGF trap也可显著改善糖尿病视网膜无细胞毛细血管结构和毛细血管基底膜的增厚,其中尤以VF28高剂量组效果最为明显。在可量化的伊文思蓝渗漏和透射电镜所显示的视网膜毛细血管基底膜增厚这两个指标,不但显著优于VF28其它剂量组,而且优于两个trap对照组。在体外实验中,高糖刺激可诱导VEGF和FGF这两个基因在mRNA和蛋白水平的上调,且均在高糖刺激后36h达到高峰。此外,VF28,VEGF trap和FGF trap均可显著降低高糖和VEGF+FGF诱导的视网膜血管内皮细胞的增殖、移行和管腔形成。结论在STZ诱导的糖尿病大鼠模型中,VF28的最佳剂量在改善糖尿病视网膜微血管功能(血-视网膜屏障破坏)和形态(血管细胞凋亡,无细胞毛细血管结构,以及毛细血管基底膜增厚)异常方面显著优于VEGF trap和FGF trap对照组。在高糖刺激实验中,FGF trap对视网膜血管内皮细胞增殖的效果最为明显,而VFGF trap在移行和管腔形成的效果均优于VF28和FGF trap。另一方面,VF28的干预效果在VEGF+FGF因子诱导的实验中更加明显,在所检测的三个指标中,均优于VEGF trap和FGF trap的干预效果。