[目的]探讨Sirt1介导HCV核心蛋白影响肝细胞甘油三酯合成的调控机制。[方法]1.通过Real-time PCR、Western blot以及TG定量测定法等方法,从mRNA及蛋白水平等方面验证HCV核心蛋白可以促进肝细胞甘油三酯的合成。2.在体外,应用小干扰RNA技术和短发夹RNA(shRNA)敲除Sirt1后,探究HCV核心蛋白对脂质相关基因调控的研究。3.在体内,应用Cre/LoxP系统,繁殖肝脏特异性敲除Sirt1小鼠。4.构建HCV核心蛋白的慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-HCV core和包装HCV核心蛋白的慢病毒。[结果]1.TG定量测定结果显示,过表达pcDNA3.1/myc-His-core1b/3a后,HCV core能够显著增加HepG2细胞内的甘油三酯含量。2.Real-time PCR结果显示,在HepG2细胞内,HCV core可以上调脂质合成相关基因(SREBP1c、FASN和PPARy)的mRNA表达水平。3.Western blot结果显示,在HepG2细胞内,HCV core可以上调脂质合成相关基因(SREBP1和PPARγ)的蛋白表达水平。4.在细胞干扰实验中,Western blot结果显示,在Sirt1被成功敲降后,SREBP1和FASN的蛋白表达水平下调。5.肝脏特异性敲除Sirt1小鼠繁殖成功。6.HCV核心蛋白的慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-HCV core构建成功,并且HCV核心蛋白慢病毒包装成功。[结论]在体外实验中,pcDNA3.1/myc-His-core在HepG2细胞中成功表达,与转染pcDNA3.1/myc-His(-)空载体组相比,HCV core过表达时促进HepG2细胞内脂质相关基因在mRNA、蛋白的表达水平并提高细胞内TG含量,组间具有显著统计学意义(P<0.05)。干扰Sirt1后,同时过表达HCV core,脂质相关基因的蛋白表达水平下降。体内实验研究成功繁殖肝脏特异性敲除Sirt1小鼠,并且成功构建慢病毒表达载pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-HCV core。从细胞实验中,我们可以总结出,Sirt1介导HCV core对肝细胞脂质合成的调控,促进细胞内脂质合成。在下一步的实验中,我们将在基因敲除Sirt1小鼠体内进行慢病毒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-HCV core的过表达实验,为进一步在体内验证Sirt1是否介导HCV核心蛋白对肝细胞内甘油三酯合成的调控。