VEGF基因修饰脂肪间质干细胞及其诱导成骨分化的研究

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本文通过构建重组腺病毒载体,将VEGF基因导入分离培养的脂肪间质干细胞中,观察重组腺病毒对ADSCs的感染效率和外源基因的表达稳定性,证实了重组腺病毒载体是对组织工程中的种子细胞进行基因修饰的理想载体。以VEGF基因修饰ADSCs,培养于成骨条件培养基中,检测ADSCs表达成骨细胞标志,观察VEGF对干细胞成骨分化的影响。结果显示,VEGF能够诱导ADSCs发生矿化,但其诱导细胞矿化的能力明显逊于BMP-2,但VEGF在诱导ADSCs成骨过程中对ALP的作用明显。在BMP-2诱导ADSCs成骨的不同时间点转染VEGF腺病毒,观察VEGF对ADSCs成骨分化是否有促进作用,结果显示,VEGF在诱导ADSCs成骨分化过程中的主要作用可能是促进成骨细胞分化,或者促进分化成熟的ADSCs表达成骨细胞标志抗原和骨形成。为了探讨VEGF诱导和促进成骨机制,我们采用RT-PCR方法分析了Cbfal和Osterix成骨分化调节基因的mRNA水平。结果显示,Cbfal基因在VEGF诱导的成骨分化的早期启动分化阶段没有明显作用。我们通过体外细胞实验证实了BMP-2、VEGF对ADSCs成骨分化的诱导和促进作用,为ADSCs与基质材料复合构建组织工程化骨及骨折不愈合或延迟愈合的局部基因治疗奠定了初步的基础,VEGF诱导成骨分化的体内实验有待下一步完成。
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