【摘 要】
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目的:缺血心肌恢复血流再灌注后会导致心肌出现缺血再灌注损伤(MIRI),其中再灌注心律失常可引起致死性心律失常危及生命。本研究采用Langendorff灌流系统建立大鼠离体心脏I/R模型,观察丹参素预适应及后处理对离体I/R大鼠再灌注心律失常、氧化应激、钙转运相关蛋白表达及磷酸化修饰的影响;细胞水平观察其对I/R心肌细胞钙波及肌浆网钙泄漏的影响,阐明丹参素防治缺血再灌注心律失常的机制。方法:(1)
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目的:缺血心肌恢复血流再灌注后会导致心肌出现缺血再灌注损伤（MIRI）,其中再灌注心律失常可引起致死性心律失常危及生命。本研究采用Langendorff灌流系统建立大鼠离体心脏I/R模型,观察丹参素预适应及后处理对离体I/R大鼠再灌注心律失常、氧化应激、钙转运相关蛋白表达及磷酸化修饰的影响;细胞水平观察其对I/R心肌细胞钙波及肌浆网钙泄漏的影响,阐明丹参素防治缺血再灌注心律失常的机制。方法:（1）离体心脏实验中,使用Langendorff灌流装置建立离体心脏缺血再灌注I/R模型。采用随机双盲法将清洁级SD大鼠分为Control组、I/R组、I/R+低剂量DSS组、I/R+中剂量DSS组、I/R+高剂量DSS组、I/R+Ryanodine（Ry R2通道调节剂）、I/R+Ryanodine+中剂量DSS组。心电图记录监测离体心脏再灌注30min期间各组心律失常的发生情况,主要观察室速和室颤的发生率、发生时间及发生次数的变化;收集冠脉流液并留取心肌组织检测SOD活性和MDA的含量;Western blot法测定钙转运相关蛋白Ca M、Ca MKⅡ、Ry R2-p Ser2814蛋白的表达。（2）细胞实验中,酶解法急性分离大鼠心室肌细胞,缺血液（无糖K-H液、2-Deoxy-D-glucose、Na2S2O4）灌流建立MIRI细胞模型,采用随机双盲法将实验分为Control组、DSS组、I/R组、I/R+中剂量DSS组、I/R+KN-93（Ca MKⅡ抑制剂）组、I/R+K201（Ry R2通道稳定剂）组。激光共聚焦显微镜胞内钙成像技术观察Control组、DSS组、I/R组、I/R+中剂量DSS组、I/R+KN-93组心肌细胞内自发性钙波及Control组、DSS组、I/R组、I/R+中剂量DSS组、I/R+K201组肌浆网的钙泄漏。结果:（1）离体心脏实验结果显示:缺血再灌注后各组均发生了心律失常,心肌及冠脉流液中SOD的活性降低,MDA的含量升高,心肌Ca MKⅡ及其介导的Ser2814位点磷酸化Ry R2的蛋白表达明显上调。丹参素可以降低因缺血再灌注导致的心律失常的发生率（P<0.01）,缩短心律失常的发生时间（P<0.05）,减少室速和室颤的发生次数（P<0.05）,且对室速的发生次数及发生率具有剂量依赖性;丹参素（中剂量组）可以同时缩短室速和室颤的发生时间。丹参素可升高缺血再灌注心肌及冠脉流液中SOD的活性（P<0.05）,降低MDA的含量（P<0.05）,可降低Ca MKⅡ及Ser2814位点Ry R2磷酸化的蛋白表达（P<0.05）。（2）细胞实验结果显示:缺血再灌注心肌细胞产生自发性钙波和肌浆网钙泄漏。丹参素可以减少缺血再灌注心肌细胞自发性钙波的发生次数（P<0.01）,且3HZ要较1HZ频率电刺激降低的更明显。可以减少因缺血再灌注导致的心肌细胞肌浆网的钙泄漏（P<0.05）。结论:（1）丹参素可减少离体心脏再灌注心律失常的发生,对抗氧化应激损伤,发挥保护心肌的作用。（2）丹参素可降低缺血再灌注心肌Ca MKⅡ和Ry R2-p Ser2814蛋白的表达,从而调节Ry R2钙释放通道,减少自发性钙波及肌浆网钙泄漏的发生,防治缺血再灌注心律失常。
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