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目的：研究表明SDF-1/CXCR4信号轴在移植细胞向损伤部位迁移中发挥重要作用，而干细胞能够对退变椎间盘起修复作用。本实验室前期实验中已经发现在人和兔退变的椎间盘组织中存在着SDF-1的浓度表达梯度，但由于CXCR4在MSCs表面的表达率比较低，可能影响其向损伤部位迁移。所以本研究旨在合成CXCR4基因，构建CXCR4真核表达载体并转染MSCs，提高CXCR4在MSCs的表达，进而为后期利用SDF-1/CXCR4轴的趋化机制提高MSCs的迁移效率并促进对退变椎间盘修复提供实验基础。 材料和方法： 1.根据GenBank中已发表的兔CXCR4(Gene ID100346189)编码区全长及酶切位点需要，设计重叠引物，采用OE-PCR的方法合成CXCR4的cDNA。双酶切将pIRES2-EGFP真核表达载体，和CXCR4基因片段连接，构建CXCR4-pIRES2-EGFP重组质粒，转化抽提质粒并保存。进行双酶切、PCR及测序鉴定。 2.复苏前期实验中冻存的BMSCs，建立体外培养体系。 3.脂质体法转染无内毒素重组质粒及空白质粒到BMSCs，观察细胞生长情况，荧光显微镜观察EGFP表达情况。β-actin作为内参半定量RT-PCR检测CXCR4瞬时转染效率。 4.在Transwell小室内观察MSCs、空白质粒转染MSCs、CXCR4-MSCs对SDF-1的体外趋化迁移情况。 5.预实验获取G418筛选浓度，G418筛选MSCs。 结果： 1.酶切、测序鉴定均证明CXCR4 cDNA和重组质粒CXCR4-pIRES2-EGFP构建正确，大量提取的无内毒素质粒可以用作进一步实验。 2.复苏后的MSCs生长形态、活力曲线及增殖情况均提示细胞复苏成功。 3.转染后24小时荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达提示转染成功，半定量RT-PCR提示CXCR4表达量较空白组增强约21％。 4.SDF-1浓度为0时，三组细胞迁移数目无明显差异(p>0.05)；SDF-1浓度为10，100μg/l时，CXCR4转染组细胞迁移数目明显高于末转染组和空白质粒转染组(p<0.01)。 5.G418筛选的MSCs大量死亡，存活细胞的绿色荧光蛋白表达率于未筛选前无明显差异(p>0.05)。 结论： 1.采用OE-PCR成功合成兔CXCR4 cDNA： 2.成功构建了携带有兔CXCR4基因的CXCR4 pIREs2-EGFP真核表达载体，并扩大提取保存，可以直接用于转染兔骨髓间充质干细胞，亦可作为慢病毒转染的穿梭质粒； 3.成功复苏了液氮冻存的兔骨髓间充质干细胞，并建立了稳定的高纯度细胞系； 4.使用构建的CXCR4-pIREs2-EGEP真核表达载体成功转染兔骨髓间充质干细胞； 5.CXCR4-pIRES-EGFP质粒转染法雄以获得可稳定表达CXCR4的兔骨髓间充质干细胞株。