禽流感病毒（Avine Influenza Virus,AIV）是单股负链RNA病毒,属于正粘病毒科,是禽类的重要病原。由于病毒表面抗原不稳定,在复制过程中容易发生基因错配致使结构发生改变,从而获得感染人能力,对人类生活造成影响。禽流感型别多样,根据在感染禽类上的致病特点可分为高致病性与低致病性。其中H5型已被世界动物安全组织以及世界卫生健康组织列为对人类影响极大具有高威胁性的一种禽流感病毒。2014年我国四川地区报导出第一起H5N6感染人病例,随后广州、云南等地相继报出人感染H5N6事件。其高致病性可引起急发临床症状,甚至导致死亡,严重威胁人类健康。不同地区禽流感流行状况差异较大,近年来对湖北地区禽流感流行进行监测,显示H5N6在该地区具有较高流行率,且可在短时间内发生新的基因重排,使得病毒型别复杂多样。作为人禽接触的重要媒介场所,多种禽类聚集的活禽市场是出现禽流感病毒宿主变换的好发场所。由于禽流感病毒在活禽市场更易发生病毒变异,因此我们选择在活禽市场开展调查,进一步研究禽流感病毒变异及其对致病性的影响。我们于2018年1月-4月对武汉江夏区与黄陂区的活禽市场进行了禽流感监测,采集主要禽类（鸡、鸭）的肛拭子和新鲜粪便共计445份,RT-PCR检测发现160份为禽流感病毒阳性,阳性率为35.96%,其中混合感染率37.5%。禽流感阳性标本中H5N1型仅占1.25%,而H5N6阳性率高达15%。将H5N6样本提取RNA后,基于HA和NA序列扩增测序,进行分子遗传进化分析,对比显示此次检出的H5N6与2014-2016年期间检出的H5N6存在碱基变异,但均属于Clade 2.3.4.4,属于一种高致病性亚型。结果提示,此种高致病性H5N6亚型近年来一直在武汉地区活禽市场流行甚至发生基因错配,是禽流感流行的优势株型。为避免人感染H5N6事件在湖北地区发生,除掌握H5N6的流行变化趋势外,了解该病毒型别的致病性和感染性特征可加强对该型别禽流感有效防控。因而本实验室从收集的样本中分离出高致病性H5N6新基因型（J52）进行体内、体外研究实验,分析比较J52在A549细胞与MDCK细胞复制变化以及病毒在BALB/c小鼠体内的致病能力、组织嗜性（包含心、肝、脾、肺、肾、脑、肠）、和细胞因子改变情况。通过观测CPE,结合血凝实验结果发现病毒感染后在MDCK细胞与A549细胞上复制表达不一,J52在A549细胞上扩增速度快,复制能力较低。将病毒感染BALB/c小鼠,病毒感染小鼠出现体重减轻、冷颤抽搐症状,死亡现象。病毒滴定结果显示J52对小鼠半数致死量LD50为10-5.27。小鼠心、脑、肺组织中均可检测到病毒核酸,鼠肺株型仍在中病毒核酸表达最高。肺组织病理切片结果显示,禽流感病毒可导致肺泡组织损伤,引起淋巴细胞聚集,红细胞渗漏等炎性反应。在感染病毒后,鼠肺中细胞因子IL-6,IL-10,IL-1β,TNF-α,IFN-α,IFN-γ分别出现不同程度的上升,其中IL-6上升最为明显。综上所述,高致病性H5N6作为湖北地区的AIV优势流行武汉及周边地区流行,病毒对MDCK细胞与A549细胞均表现易感,但是增殖速率不同,病毒对小鼠致死能力显示为高致病性病毒。本研究对掌握湖北地区AIV H5N6型别变异趋势,了解H5N6的致病性特点对于湖北省禽流感的预防监测和防控具有重要的现实意义。