琼胶寡糖特效降解与分离纯化的研究

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琼胶是从江蓠、石花菜等红藻类提取出的一种胶质体,而琼脂糖则是以琼胶为原料分离、精制而成的高级产品。琼脂糖是由3-O-β-D-半乳糖和4-O-3,6-内醚-α-L-半乳糖交替连接而成的链状中性糖,琼胶寡糖则是经降解后聚合度为2~10的低聚糖,包括琼寡(agaro-oligosaccharides)和新琼寡糖(neoagaro-oligosaccharides)。两种寡糖分别由琼胶酶和酸降解所获得,其中主要的一种酶β琼胶酶可以裂解β,1-4糖苷键生成新琼寡糖;α琼胶酶或酸则裂解α,1-3糖苷键产生琼寡糖。琼胶寡糖的研究显示出其多种生物活性,且不同聚合度的寡糖变现出不同的生物活性。新琼寡糖和琼寡糖所具有的生物活性使其潜在的应用价值非常大,所以具有重大研究价值,而寡糖的获取、分离就显得格外的重要。本课题琼寡糖作为研究目标,对其降解方法及结构进行了研究,通过不同的降解方法,获得特定聚合度的琼寡糖。  本文的主要工作和成果如下:  1.基于琼胶寡糖的不同生物活性,所以获得特定聚合度的寡糖具有非常重大的意义。针对琼胶降解产生多种不同聚合度的产物,本研究以通过特定的降解方式以获得特定聚合度的琼胶寡糖为目标,采用不同的降解方式对琼胶进行降解。首先以琼胶溶液反应前后粘度的变化反映琼胶降解速度的变化,研究表明盐酸的降解主要为二糖、硫酸降解产物为二、四糖。  2.研究不同降解条件(不同的酸)对琼脂糖进行降解,并对产物进行定性、定量分析。首先通过琼胶溶液降解前后的粘度变化检测降解速度,并对降解所得寡糖混合物进行TLC分析,初步确定了琼胶降解条件;分别考察浓度、反应时间、温度、底物浓度等因素对降解琼胶生产琼胶寡糖的影响;最后根据单因素实验结果设计正交试验,结合HPLC及核磁分析,获得了较优的降解工艺条件。经优化后盐酸降解琼胶得到二糖的得率达到28.28%;硫酸降解琼胶得到四糖得率为20.15%;柠檬酸降解降解琼胶得到四糖的得率达到了16.83%。  3.采用LC-MS对对琼胶的产物进行了初步鉴定,结果显示琼胶的降解产物主要为偶数聚合度的寡糖(琼二、四、六、八等糖)。
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