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大黄鱼(Larimichthys crocea)是我国最重要的海水养殖鱼类之一。其全基因组序列已经发表,但细胞遗传学研究仍然相当落后。因此,本研究构建了雄性大黄鱼的Hind-III BAC文库,从BAC文库中筛选出24条连锁群的特异BAC克隆作了初步评估与验证,为提高大黄鱼染色体分析提供了大量的探针,也为构建大黄鱼细胞遗传图谱奠定了基础;同时筛选雄性性别决定候选基因Dmrt1的BAC克隆,为进一步研究大黄鱼性别决定的分子机制奠定基础。主要研究结果如下:1、大黄鱼BAC文库的构建与评估用2尾雄性大黄鱼的脑组织DNA构建了Hind-III BAC文库,该文库包含41,472个克隆,平均插入片段为133 kb,空载率为1.25%,具有8.1倍的基因组覆盖率。2、连锁群特异BAC克隆的筛选与初步分析PCR法筛选BAC文库,获得72个连锁群标记阳性克隆。对72个候选克隆进行双末端测序,得到141条高质量的序列,平均长度为625 bp,总碱基数88195 bp,序列中GC含量比为41.45%,与参考基因组GC含量(41.71%)相当;其中40条序列注释到41个功能基因,12条序列挖掘到13个2~6碱基微卫星序列。将BAC末端序列与大黄鱼基因组和遗传连锁群进行比对,其中85条(60.3%)定位到预期连锁群的单位点上,22条(15.6%)定位到预期连锁群的2个位点上,12条(8.5%)定位到连锁关系未明的scaffold上,18条(12.8%)定位到非预期连锁群上,还有7条序列(5.0%)定位到基因组的多个位点上。FISH初步结果显示,预期在LG9上的3个克隆18O3、20F6和30C22经FISH后各有2对、1对和10对信号,不具有共线性。预期在LG10上的3个克隆20N3、18C9和29H16经FISH后各有1对、2对和1对信号,同样不具有共线性。预期在LG19的3个克隆75P10、77I4和60P17经FISH后各有1对、8对和9对信号,尚无法估计共线性。3、Dmrt1基因阳性克隆的筛选与初步分析PCR法筛选了5个Dmrt1基因阳性克隆,编号分别为:克隆8G22、30N15、49L4、71K22和78O2。PCR产物序列分析结果显示,5个克隆验证序列呈XY基因型,与参考基因组符合率均在94.50%以上。性别标记检测结果显示,其中,克隆30N15源于Y染色体,克隆8G22、49L4、71K22和78O2源于X染色体。双末端测序获得10条高质量的序列,平均长度为783 bp,总碱基数7826 bp,序列中GC含量比为39.50%,低于参考基因组的GC含量(41.71%)。经比对有5条序列定位到预期连锁群,还有5条定位到非预期的连锁群,其中6条定位到单位点,2条定位到2个位点;还有2条序列定位到基因组的多个位点上。BAC-FISH结果显示,5个Dmrt1基因阳性克隆均定位于18S rDNA所在染色体的近着丝粒处。该对染色体的形态及Dmrt1阳性信号在雌雄个体未显示明显的差别。