背景:基于间充质干细胞（MSCs,mesenchymal stem cells）的无细胞疗法已被广泛用于瘢痕增生的治疗,成为再生医学研究的新模式。干细胞条件培养基含有干细胞旁分泌的因子而不含有细胞成分,使用安全有效,无成瘤性的风险,因此有可能作为干细胞治疗的一种更好的替代方案。然而,干细胞上清液所含有的细胞因子浓度较低,伴随着直接创面给药时有效蛋白的维持量不足和起效时间较短,基于干细胞的无细胞疗法仍然面临着一些瓶颈亟待突破。本研究采用多聚糖水凝胶作为支架与冻干脂肪干细胞条件培养基共同用于预防瘢痕增生的研究,旨在优化脂肪源性间充质干细胞条件培养基（ADSC-CM,adiposederived stem cells conditioned medium）抑制增生性瘢痕形成的疗效。方法:采用真空冷冻干燥法浓缩ADSC-CM,并使用BCA试剂盒对不同浓度的ADSC-CM进行检测。在此基础上,通过体外试验观察低、中、高剂量组对人瘢痕疙瘩成纤维细胞（HKFs,human keloid fibroblasts）增殖、凋亡及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA,alpha-smooth muscle actin）表达的影响。同时初步研究了多聚糖水凝胶的成胶特性并使用扫描电镜观察了凝胶内部的微观结构,随后在体内试验中,联合脂肪干细胞浓缩条件培养基（ADSCC-CM,adipose-derived stem cells concentrated conditioned medium）与多聚糖凝胶对兔耳增生性瘢痕模型进行干预,并展开了为期4个月的观察,使用瘢痕增生指数（SEI,scar elevation index）对瘢痕增生情况进行评估,采用苏木精-伊红（H&E,haematoxylin-eosin）染色观察皮肤附属器及瘢痕组织大体结构,Masson’s三色染色评价胶原纤维排布情况。使用蛋白质质谱捕获了ADSCC-CM中丰度较高的前50位蛋白,并深入分析与探讨了可能起效的细胞因子。结果:冻干浓缩法可以有效地实现干细胞条件培养基的浓缩与细胞因子的富集,浓缩液总蛋白的含量与浓缩倍数成比例增加。ADSCC-CM可下调HKFs中α-SMA的表达,促进成纤维细胞的凋亡,该作用呈剂量依赖性。在兔耳模型上,中剂量组（CM5,five times concentrated conditioned medium of ADSCs）和高剂量组（CM10,ten times concentrated conditioned medium of ADSCs）在4个月的观察期中均能有效抑制瘢痕增生,降低SEI。值得注意的是,采用CM5与多聚糖水凝胶（CM5+H,CM5 mixed with polysaccharide hydrogel）联合使用对瘢痕增生的预防效果最优,CM5+H组皮肤的色素沉积、柔韧性和瘢痕的增生程度、血管化情况均优于对照组,胶原排布更为均匀,伴有部分皮肤附属器的再生。经扫描电镜可知,多聚糖水凝胶内部含有网络状结构,可能起到缓释细胞因子的作用。通过蛋白质质谱检测到了ADSCC-CM中丰度较高的候选蛋白,如HSP90AA1、HSP90AB1、Myh9、ENO1,其中,HSP90α、PDI可能参与创面修复,TAC和EF-1α可能与瘢痕抑制有关。结论:ADSCC-CM具有抗纤维化的能力,在预防瘢痕形成发挥着关键的作用。ADSCC-CM与多聚糖水凝胶的原位交联能够优化抑制瘢痕增生的疗效,二者结合可以减缓功能蛋白的释放,通过抑制成纤维细胞的生长增殖,下调成纤维细胞α-SMA的表达,同时促进胶原纤维的重排,诱导皮肤附属器修复重建,达到长期稳定抑制瘢痕增生的目的,有望成为预防瘢痕增生的新途径。