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遗传修饰的实验动物是研究基因功能的有力工具,通过它们我们可以直接检测病理学过程中,结构与功能以及病因与症状之间的关系。目前,转基因小鼠已经成为研究部门广泛采用的研究工具。但是,为了能让动物上的研究成果更好的服务于人类,还需要发展相对较大的哺乳动物转基因模型。转基因兔的开发,为探索和研究人类疾病机制提供了新的前景。然而生产转基因兔的传统方法存在许多缺陷,限制了转基因兔的生产。为了建立高效的转基因兔生产体系,本研究对兔体细胞核移植体系一些重要环节进行了系统研究并获得了克隆兔,我们初步探讨了不同供体细胞影响兔重构胚发育能力的机理,摸索了将体细胞核移植体系与转基因技术结合的技术路线;另外我们还采用病毒转染的方法和原核显微注射法获得了人类疾病模型转基因兔。结果表明:(1)PMSG&HCG与FSH&HCG两种超排方案,超排效果差异不显著;采用纺锤体观测仪辅助去核,去核效果最好,去核率能够达到100%;以EBSS-complete培养基作为兔胚胎培养液,兔孤雌胚胎的体外发育情况最好;我们建立的兔胚胎移植体系的移植胚胎出生率可以达到43%的高效率;我们以新鲜颗粒细胞作为核供体,克隆兔的出生率达到了26.7%,因此是高效的兔体细胞核移植体系。(2)兔胎儿成纤维细胞适合作为转基因的靶细胞;对胎儿成纤维细胞进行基因转染筛选不影响核移植效率;以新鲜颗粒细胞做核供体重构胚(CC胚胎)的体外体内发育能力明显优于胎儿成纤维细胞重构胚(FF胚胎);兔受精胚胎和核移植胚胎在一细胞早期不发生DNA主动去甲基化;FF胚胎核重塑事件的异常比率显著高于CC胚胎,所以供体细胞融合后核异常重塑事件很可能是导致不同供体细胞重构胚发育能力差异的重要因素。(3)通过病毒转染技术我们获得了A53T和ATX80Q转基因兔,并且得到了F1代的A53T转基因兔;对受精卵进行原核显微注射,我们获得了7只转人类CD4&CCR5基因阳性兔。总之,本实验对兔体细胞核移植程序进行了优化,对兔体细胞核移植胚胎早期发育的重编程机理进行了有益探讨和论述,建立了多种生产转基因兔的方法,为建立高效的转基因兔生产体系奠定了坚实基础。