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白血病是青少年常见的恶性肿瘤之一,由于化疗、骨髓移植和嵌合抗原受体T细胞(CAR T)治疗技术的逐渐提高,使得白血病的5年存活率达62%以上。然而,白血病的复发和难治疗性的问题仍然比较严峻。虽然临床试验已经有药物用于靶向治疗白血病,但是耐药性和毒副作用等问题比较显著。由于肿瘤特异性T细胞,特别是CD8+T细胞(CTL)在杀伤和清除肿瘤中发挥重要作用,因此研究新型特异性高、安全性好的肿瘤免疫治疗性疫苗用于活化特异性CTL,是应对白血病的有效手段之一。肿瘤干细胞因为具备自我更新、无限增殖和分化形成肿瘤的能力,并且对化疗、放疗具有抗性,被认为是肿瘤复发的根源所在。多种肿瘤中都发现了CD133~+肿瘤干细胞,提示CD133抗原可以作为CTL识别的靶点,这也为设计新型白血病治疗性疫苗提供了线索。热休克蛋白gp96作为分子伴侣不仅可以激活T细胞免疫,同时也可以激活先天免疫。本研究首先利用昆虫细胞表达系统,表达有免疫学功能的重组gp96蛋白。通过表位预测,发现CD133含有6个潜在H2-Kd限制性的表位,分别是CD133272-281(QNMSSSLKSL)、CD133419-428(RYLNQELPKL)、CD133452-461(FFFLGLLCGV)、CD133601-609(NLNVNIDSI)、CD133702-710(TLRQSVWTL)和CD133760-769(HYLHWVFYAI)。进一步将重组gp96作为T细胞疫苗佐剂,通过小鼠免疫实验鉴定出3个可活化特异性的CTL表位,分别是CD133419-428、CD133702-710和CD133760-769。在此基础上,将这三个表位联合gp96佐剂制备新型表位疫苗,在小鼠CD133~+淋巴细胞性白血病的模型中,CD133表位疫苗引发抗肿瘤特异性T细胞免疫应答。在预防模型中,免疫表位疫苗后小鼠肿瘤体积和重量与对照组相比都下降了43%(P<0.05);ELISPOT实验证明表位疫苗免疫后CD133419-428、CD133702-710和CD133760-769表位特异的T细胞比对照组分别增加了4.6、0.6和1.2倍;分离免疫后小鼠的脾脏T细胞进行细胞毒性实验,发现当效应细胞与靶细胞比为20:1时,表位疫苗组对靶细胞的特异性杀伤作用明显地高于对照组(P<0.05)。在治疗模型中,免疫表位疫苗后小鼠肿瘤体积和重量与对照相比分别下降了31%(P<0.05)和30%(P<0.05);分离免疫后小鼠的脾脏T细胞进行细胞毒性实验,发现当效应细胞与靶细胞比为20:1时,表位疫苗组对靶细胞的特异性杀伤作用极显著地高于对照组(P<0.01)。最后,在荷瘤小鼠体内转输CD133表位疫苗激活的特异T细胞,能显著地抑制肿瘤生长。综上所述,本研究以小鼠淋巴细胞性白血病为模型,设计了以gp96为佐剂的、新型的抗CD133~+肿瘤的治疗性表位疫苗,通过小鼠实验验证该疫苗能够活化CD133特异性CTL应答,显著抑制小鼠淋巴瘤的生长,这为进一步研发靶向CD133~+的白血病等肿瘤治疗性疫苗提供了依据。