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目的:分析补肾强督治偻方有效化学成分,并观察补肾强督治偻方以及有效化学成分对LPS(脂多糖)诱导的RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞)细胞模型的IL-23/Th17炎症轴的影响。方法:运用HPLC(高效液相色谱法)对补肾强度治偻方水提液以及粉末超声液进行药物成分分离,初步获得色谱峰图谱,通过与标准品色谱峰保留时间的比对,指认所含有的标准品化合物成分。运用LPS作用于RAW264.7细胞,诱导炎症细胞模型;采用MTT比色法(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法)观察补肾强督治偻方以及有效化学成分对RAW264.7细胞增殖作用的影响;Griess法(硝酸还原酶法)检测细胞上清NO表达水平;采用RT-PCR(逆转录-聚合酶链式反应)技术检测IL-17、IL-23、RORγt(维A酸相关孤独受体γt)、TNF-ɑ、IL-6 mRNA的表达水平;采用IF(免疫荧光技术)检测IL-17蛋白的免疫荧光表达水平。成果:1、补肾强督治偻方水提液中指认出川芎嗪,芍药苷和柚皮苷三种化合物,补肾强督治偻方粉末超声液指认出五种化合物,除川芎嗪,芍药苷和柚皮苷外,还有蛇床子素和熊果酸。2、补肾强督治偻方(0-400μg/ml)干预RAW264.7细胞12h和24h,对细胞增殖无影响,与空白组(Control)比较差异无统计学意义(P>0.05);塞来昔布对RAW264.7细胞增殖具有抑制作用,从25μM分界,随着浓度增加,塞来昔布表现出抑制率迅速上升的趋势,到50μM干预浓度,抑制率超过50%;熊果酸对RAW264.7细胞增殖具有抑制作用,抑制率与药物浓度和干预时间相关,以2μM为界,随着药物浓度的增加和干预时间的延长,抑制率不断增加;川芎嗪干预RAW264.7细胞12h和24h,药物浓度(0-10μM)对细胞生长均无抑制作用,与空白组比较,差异无统计学意义(P>0.05);蛇床子素对RAW264.7细胞增殖具有抑制作用,时间点12h和24h的药物浓度(0-7μM)对细胞生长均无抑制作用,与空白组比较,差异无统计学意义,8μM及以上浓度对RAW264.7细胞增殖具有明显的抑制作用,与空白组比较,差异具有明显统计意义(P<0.001);柚皮苷对RAW264.7细胞增殖具有抑制作用,8μM以及以上浓度对RAW264.7细胞增殖具有抑制作用,时间点12h的8μM药物浓度,与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05),时间点24h的8μM药物浓度,与空白组比较,差异具有明显统计学意义(P<0.01);芍药苷(0-10μM)干预RAW264.7细胞12h和24h,对细胞增殖无影响,与空白组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3、相对于空白组,经LPS诱导的RAW264.7模型细胞,细胞上清的NO表达显著上升(P<0.001);细胞IL-17、IL-23、RORγt、TNF-ɑ、IL-6 mRNA的表达显著增加(P<0.001);细胞IL-17蛋白的免疫荧光表达显著增强(P<0.001)。4、相对于模型组,补肾强督治偻方高中低剂量组可显著下降细胞上清NO表达水平(P<0.001);补肾强督治偻方高中低剂量组均能显著降低IL-17、RORγt、TNF-ɑ、IL-6 mRNA的表达量,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.001),而对于细胞IL-23 mRNA的表达,补肾强督治偻方低剂量对其具有抑制作用,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),中高剂量组对IL-23 mRNA表达无影响,与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05);补肾强督治偻方高剂量组能明显抑制细胞IL-17蛋白荧光表达,与模型组比较,差异明显,具有统计学意义(P<0.001),而低剂量组和中剂量组对细胞IL-17蛋白荧光表达无明显影响,与模型组比较,无统计学意义(P>0.05)。5、相对于模型组,熊果酸高中低剂量均可显著下降细胞上清NO表达水平(P<0.001);熊果酸高中低剂量组均能显著降低细胞IL-17、IL-23、TNF-ɑ、IL-6 mRNA的表达量,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.001),而细胞RORγt mRNA的表达,熊果酸高中剂量对其具有抑制作用,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);熊果酸高中低剂量组均能显著抑制细胞IL-17蛋白荧光表达,与模型组比较,差异明显,具有统计学意义(P<0.001)。6、相对于模型组,川芎嗪高中低剂量均可显著下降细胞上清NO表达水平(P<0.001);川芎嗪高中低剂量组均能显著降低细胞IL-17、IL-23、TNF-ɑ、IL-6 mRNA的表达量,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.001),川芎嗪高剂量组也能降低RORγt mRNA的表达,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.001),川芎嗪中剂量组降低了RORγt mRNA的表达,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.01),川芎嗪低剂量组对模型细胞RORγt mRNA的表达水平无影响,与模型组比较,没有统计学意义(P>0.05);川芎嗪高剂量组显著抑制细胞IL-17蛋白荧光表达,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05),而低中剂量组对细胞IL-17蛋白荧光表达无影响,与模型组比较,无统计学意义(P>0.05)。7、相对于模型组,蛇床子素的中高剂量组可显著下降细胞上清NO表达水平(P<0.001),低剂量组对细胞上清NO表达无影响(P>0.05);蛇床子素高中低剂量组对细胞IL-17、IL-23、RORγt、TNF-ɑ、IL-6 mRNA的表达无影响,与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05);蛇床子素高中低剂量组对细胞IL-17蛋白荧光表达无影响,差异无统计学意义(P>0.05)。8、相对于模型组,柚皮苷的中高剂量可显著下降细胞上清NO表达水平(P<0.001),低剂量组对细胞上清NO表达无影响(P>0.05);柚皮苷高中低剂量组对细胞IL-17、IL-23、RORγt、TNF-ɑ、IL-6 mRNA的表达无影响,与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。9、相对于模型组,芍药苷高中低剂量对细胞上清NO表达水平无影响(P>0.05)。芍药苷高中低剂量组对细胞IL-17、IL-23、RORγt、TNF-ɑ、IL-6 mRNA的表达无影响,与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。10、相对于模型组,塞来昔布可显著下降细胞上清NO表达水平(P<0.001);塞来昔布能显著降低细胞IL-17、RORγt、TNF-ɑ、IL-6 mRNA的表达量,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.001),而对细胞IL-23 mRNA的表达无影响(P>0.05);塞来昔布能抑制细胞IL-17蛋白荧光表达,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:1、HPLC实验证明,补肾强督治偻方中存在川芎嗪,芍药苷、柚皮苷、蛇床子素和熊果酸五种化合物。2、本研究证明RAW264.7模型细胞存在炎性因子的表达上升和IL-23/Th17轴的失衡,说明RAW264.7炎症模型构建成功,可用于补肾强督治偻方药及其化学成分抗炎作用的研究和靶向IL-23/Th17轴机制的研究。3、补肾强督治偻方可以抑制RAW264.7模型细胞NO和炎性因子TNF-ɑ、IL-6的表达,同时可以抑制IL-17、RORγt、IL-23的表达,且对细胞增殖无影响,说明补肾强督治偻方具有抗炎作用,可以调节IL-23/Th17炎症轴,且具有低细胞毒性。4、补肾强督治偻方中的有效成分熊果酸和川芎嗪也可以抑制RAW264.7模型细胞NO和TNF-ɑ、IL-6、IL-17、RORγt、IL-23的表达,说明这两个化合物具有抗炎作用且可以调节IL-23/Th17炎症轴,是参与补肾强督治偻方发挥抗炎作用和调节IL-23/Th17炎症轴的有效化合物。5、补肾强督治偻方中的柚皮苷和蛇床子素可以抑制RAW264.7模型细胞NO的表达,但是对TNF-ɑ、IL-6、IL-17、RORγt、IL-23的表达无影响,说明柚皮苷和蛇床子素具有一定的抗炎作用,但对IL-23/Th17炎症轴无影响。芍药苷抗炎作用不明显且对IL-23/Th17炎症轴无影响。