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在大多数国家中，卵巢癌是女性最致命的妇科恶性肿瘤之一[1]。其中又以上皮性卵巢癌最常见，大约占卵巢恶性疾病的70%，女性恶性肿瘤中居第六位，癌症相关死亡原因居第五位[2]。大多数患者早期无明显症状，70%患者发现时已属晚期[3]。在过去几十年里，尽管手术联合化疗等治疗手段的不断进步，但卵巢癌复发率和死亡率仍然很高[4-5]。其五年生存率仅有30-40%[6]，死亡率居妇科恶性肿瘤首位。因此，迫切的寻求对抗卵巢癌的生物标志物，以便更好的早期诊断和早期治疗是目前研究的重点。Basigin（CD147, EMMPRIN, neurothelin,5A11, gp42, OX-47, CE9）是一种高度糖基化的单次跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族粘附分子(IgSF)成员[7-8]，分子量58KDa，有四种剪接变异体。Basigin最为主要的功能是刺激肿瘤细胞及其周围成纤维细胞，产生多种基质金属蛋白酶（MMPs），降解细胞外基质，促进肿瘤细胞的浸润和转移[9-10]。此外，Basigin的功能还包括胚胎发育、T细胞活化、生殖、神经及视网膜功能。Basigin在多种恶性肿瘤中呈高表达，与肿瘤的发生发展及侵袭转移密切相关。Basigin的高表达还与卵巢癌患者的预后不良有关，可作为卵巢癌独立的预后因素。Basigin具有4个剪接变异体，对于其剪接变异体的研究较少，其在卵巢癌的表达与功能如何是相关领域的研究前沿之一。本研究首次报道3种Basigin剪接变异体在卵巢癌细胞系及卵巢癌组织中的表达情况，并且通过研究Basigin-2与临床病理资料的相关性，发现Basigin-2与上皮性卵巢癌患者的预后密切相关。我们进一步在卵巢癌细胞系中验证了Basigin-2的生物学功能，初步评估了Basigin-2作为卵巢癌靶点的可行性，为卵巢癌的治疗提供了新的思路。目的1.明确Basigin剪接变异体在上皮性卵巢癌的表达情况。2.明确Basigin-2的表达与上皮性卵巢癌的临床病理特征及预后的相关性。3.明确Basigin-2对卵巢癌细胞侵袭转移的影响。方法1.应用RT-PCR、Taqman实时荧光定量-PCR、western-blot观察Basigin剪接变异体在上皮性卵巢癌细胞系及卵巢癌组织中的表达。2. Basigin-2的表达与其临床病例因素间的关系及预后的相关性分析。a)运用免疫组织化学技术分析Basigin-2在146例上皮性卵巢癌石蜡标本组织中的表达；b)运用Kaplan Meier analysis和Cox proportional hazards model分析Basigin-2与临床病例因素间的关系及预后的相关性分析。3. pcDNA3.1-Basigin-2真核表达载体和SiRNA-Basigin-2分别转染低转移卵巢癌细胞株HO-8910和高转移卵巢癌细胞株HO-810PM，观察转染后Basigin-2的蛋白表达，并用明胶酶谱法、Transwell侵袭小室、划痕试验检测转染后卵巢癌细胞的生物学功能。结果1.观察Basigin剪接变异体在上皮性卵巢癌细胞系及卵巢癌组织中的表达。a) RT-PCR分析Basigin剪接变异体在五株上皮性卵巢癌细胞系的表达：mRNA水平显示Basigin-2，Basigin-3和Basigin-4在五种卵巢癌细胞系中均有表达；b) Taqman实时荧光定量PCR分析71例卵巢癌组织标本和27例正常卵巢组织的Basigin-2、Basigin-3、Basigin-4mRNA的表达结果：Basigin-2和Basigin-4在上皮性卵巢癌组织中的表达水平显著高于正常卵巢组织（Basigin-2，P<0.0001；Basigin-4，P=0.0129），Basigin-3的表达水平略有升高（P=0.2703），但无统计学意义；c) Taqman实时荧光定量PCR结果： Basigin-2和Basigin-4在低转移卵巢癌细胞株HO-8910的表达水平低于高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM（P<0.05），但Basigin-2的平均拷贝数远高于Basigin-4（约100倍），有统计学意义；Basigin-3mRNA在低转移卵巢癌细胞株HO-8910和高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM表达差异，但无统计学意义（P>0.05）；d) Western blot分析Basigin-2在五株卵巢癌细胞系的蛋白表达：Basigin-2在五株卵巢癌细胞系中均有表达，但在高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM表达水平明显高于低转移卵巢癌细胞株HO-8910。2. Basigin-2的表达与其临床病例因素间的关系及预后的相关性分析。a) Basigin-2在146例上皮性卵巢癌组织病理切片中的表达，Basigin-2主要分布在细胞膜上；b)卵巢癌组织中的Basigin-2蛋白表达水平与淋巴血管间隙浸润和淋巴结转移相关（P=0.012，P=0.017）。Basigin-2的表达水平与患者年龄、FIGO分期、分级及组织病理学类型之间无统计学意义（P>0.05）；c)临床病理资料分析说明在上皮性卵巢癌患者中Basigin-2高表达组的PFS和OS较短。d)单因素Cox proportional分析，Basigin-2的表达与PFS和OS密切相关，有统计学意义(PFS, P<0.001; OS, P=0.002)；e)多因素Cox proportional分析发现Basigin-2和FIGO分期是PFS和OS的判断预后的指标。3. pcDNA3.1-Basigin-2真核表达载体对卵巢癌细胞MMPs分泌、侵袭及迁移的生物学行为的影响a) Western blot的蛋白表达：Basigin-2蛋白在pcDNA3.1-Basigin-2传染组的表达高于其对照组pcDNA3.1和空白组(P<0.05)；b)明胶酶谱实验结果：pcDNA3.1-Basigin-2传染HO-8910细胞后MMPs分泌高于其对照组pcDNA3.1和空白组(P<0.05)；c)细胞划痕实验结果： pcDNA3.1-Basigin-2传染HO-8910细胞后与对照组pcDNA3.1和空白组相比，促进了细胞的迁移能力(P<0.05)；d)细胞transwell侵袭实验结果：pcDNA3.1-Basigin-2传染HO-8910细胞后与对照组pcDNA3.1和空白组相比，促进了细胞的侵袭能力(P<0.05)。4. Basigin-2-siRNA特异性沉默Basigin-2的表达对卵巢癌细胞MMPs分泌、侵袭及迁移的的生物学行为的影响a) Western blot的蛋白表达：Basigin-2蛋白在Basigin-2siRNA传染组的表达低于其对照组和空白组(P<0.05)；b)明胶酶谱实验结果：Basigin-2-siRNA传染HO-8910细胞后MMPs分泌低于其对照组和空白组(P<0.05)；c)细胞划痕实验结果：Basigin-2-siRNA传染HO-8910细胞后与对照组和空白组相比，抑制了细胞的迁移能力(P<0.05)；d)细胞transwell侵袭实验结果：Basigin-2-siRNA传染HO-8910细胞后与对照组和空白组相比，抑制了细胞的侵袭能力(P<0.05)；结论1.本研究确定了Basigin剪接变异体（Basigin-2、Basigin-3、Basigin-4）在卵巢癌组织和细胞系中的表达情况，证明Basigin-2和Basigin-4在卵巢癌组织中特异表达，其中Basigin-2的表达量远高于Basigin-4，说明Basigin-2在卵巢癌的作用更为重要。2.发现Basigin-2在卵巢癌中高表达，Baigin-2的表达与卵巢癌的淋巴血管间隙浸润和淋巴结转移有关，Basigin-2在卵巢癌的恶性潜能中起非常最要的作用。3. Basigin-2与卵巢癌的FBS、OS有关，Basigin-2表达阳性的患者预后较差，Basigin-2可以做为患者预后的指标，有希望成为治疗上皮性卵巢癌的靶分子。4.功能实验表明Basigin-2能够促进卵巢癌细胞的迁移、侵袭能力，提示在卵巢癌的进展中发挥更重要的功能。