大黄鱼Rac、Rab7和Rab5A基因的分子特征与免疫功能的研究

来源 :集美大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ss1725
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
小G蛋白是重要的分子开关,可以调节细胞分裂、细胞骨架形成、囊泡运输、核质运输等多种细胞功能,在免疫中发挥重要作用。本研究克隆得到大黄鱼Rac1、Rac2、Rac3、Rab7和Rab5A(分别称为lycRac1、lycRac2、lycRac3、lycRab7和lycRab5A)的cDNA序列,通过与基因组序列图比对获得完整的基因序列,分析了这些基因的分子特征、组织表达特性,以及LPS、PolyI:C、副溶血弧菌等刺激后大黄鱼肝脏、脾脏和肾脏中的表达变化并对利用免疫胶体金技术对肝脏中表达的lycRAC2进行亚细胞定位,利用GSTPulldown和质谱鉴定研究了与lyc RAB5A互作的蛋白质。主要结果如下:1、RAC蛋白包括3个类型,分别为Rac1、Rac2和Rac3。lycRac1的cDNA全长2329 bp,ORF为579 bp,编码192个氨基酸;lycRac2的cDNA全长1221 bp,ORF为579 bp,编码192个氨基酸;lycRac3的cDNA全长2182 bp,ORF为579 bp,编码192个氨基酸。氨基酸多重比对显示,lycRac1与海龟(Chelonia mydas)、斑马鱼(Maylandia zebra)和红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)的Rac1基因有高相似性;lycRac2与尖吻鲈(Lates calcarifer)、亚马逊花鳉(Poecilia formosa)和剑鱼(Xiphophorus maculatus)同源性高;lycRac3与牛(Bos taurus)、热带爪蟾(Xenopus tropicalis)和蓝鲶鱼(Ictalurus furcatus)有较高同源性。通过基因组分析发现lycRac1有6个外显子,5个内含子;lycRac2有7个外显子,6个内含子;lycRac3有7个外显子,6个内含子。进化树分析表明,lycRac1、lycRac2和lycRac3均与鱼类Rac1、Rac2和Rac3聚成一支。利用荧光定量PCR技术检测三个基因在组织中的表达量,发现它们在所有检测的组织中均可以表达,其中,lycRac1在心脏中的表达量最高,血液和脑中也有较高的表达,头肾中的表达量最低;lycRac2在头肾中的表达量最高,肾脏和脾脏中也有较高的表达,肌肉中的表达量最低;lycRac3在血液中的表达量最高,脾脏和脑中也有较高的表达,肠中的表达量最低。大黄鱼受到Lpopolysaccharide,Polyinosinic Polycytidylic acid和Vibrio Parahemolyticus刺激后lycRac1、lycRac2和lycRac3在肝脏、脾脏、头肾中的表达量有不同程度的升高,纯化的lycRAC2蛋白制得多抗,Western-blot结果显示多抗特异性较高。免疫电镜结果表明,lycRAC2亚细胞定位于细胞间质。以上结果表明,lycRac1、lycRac2和lycRac3可能是与免疫相关的基因,它们在应对细菌感染中发挥不可或缺的作用,lycRAC2的亚细胞定位进一步说明lycRac2与信号传递有关。2、Rab7是属于Ras家族的小G蛋白,lycRab7的cDNA全长2218bp,开放阅读框(ORF)624 bp,编码207个氨基酸。氨基酸多重比对结果显示,lycRab7与斑马鱼(Danio rerio)、人(Homo sapiens)、家兔(Oryctolagus cuniculus)的Rab7基因同源性较高。通过基因组分析发现,lycRab7有5个外显子,4个内含子。系统进化树分析表明,lycRab7与其它鱼类可以聚成一支。实时荧光定量PCR结果显示,lycRab7在12个组织中均有表达,其中脑中的表达量最高,血液和心脏中也有较高的表达,胃中的表达量最低。大黄鱼受到LPS、polyI:C、副溶血弧菌刺激后,肝脏、脾脏和头肾中lycRab7的表达量均明显上调。纯化的lycRAB7蛋白制得多抗,Western-blot结果显示多抗特异性较高。以上结果表明,lycRab7在抵御细菌入侵中发挥重要作用。3、Rab5A是Ras家族的一员,已得到纯化的lyc RAB5A蛋白,根据GST pull down结果可知,lycRAB5A蛋白与腺苷三磷酸酶(Calcium-transporting ATPase)、肌酸激酶(Creatine kinase M-type)、肌动蛋白(Actin,alpha skeletal muscle)等蛋白互作。结果表明lycRAB5A与其他蛋白协同在机体免疫中发挥作用。
其他文献
  针对富锰渣生产过程安全隐患突出,安全状态监控有较强干扰的特点,本文研究了基于信息融合的富锰渣生产安全监控预警系统。系统采用可燃气体浓度、粉尘浓度、压力、火灾等传
有序介孔材料因具有大比表面积、高的化学稳定性、孔径单一且连续可调等优点,在吸附、分离、催化、能源等领域应用广泛。本论文基于软模板法,利用两亲性嵌段聚合物和前驱体物
中国城市化建设正处于飞速发展阶段,但由于生产力发展水平不平衡,导致城市安全建设的基础薄弱,与经济高速发展之间的矛盾日益突出,城市安全问题变得越发严峻,因而对城市安全
本文针对煤矿井下高温环境影响工人工作效率和身心健康的问题,结合高温热害矿井的特殊环境及井下工人生产工作需求,利用涡流管的能量分离特性,提出了专为矿工设计的便携式涡
文中从理论上分析了电火源引爆瓦斯气体的物理机制.根据瓦斯爆炸点火的链式反应机理构建了爆炸的能量守恒方程,由守恒方程分析得到点火能量与爆炸强度的关系,即:点火能量越高
尽管沸石分子筛具有择形催化作用,但是在沸石的外表面仍会发生非择形反应。钝化沸石分子筛外表面的酸性位可以减少副产物的形成,从而提高催化剂的择形性。然而,很多情况下,择
近年频发的"三合一"企业火灾事故,业已造成群死群伤的严重后果.本文根据浙江省相关事故信息统计来分析事故成因和规律、特点,探索选择瑟利模型——根据人的认知过程分析事故
本文通过对煤矿企业职工安全培训的分析,指出了煤矿安全培训中存在的缺陷和问题,提出培训前要做好基层矿工的培训需求调查工作,调查他们最需要得到哪些方面的培训。以增强培训
本文根据球罐泄漏事故的分析,分析导致泄漏的原因;在总结泄漏特点的基础上对球罐的泄漏场景设定,运用DNV PHAST软件对某厂区全压力罐区的乙烯球罐,进行泄漏扩散以及燃爆事故
为了解常用PVC地板装饰材料的热分解特性,本文利用综合热分析仪(TG/DTA)分别在5、10和20℃/mm的升温速率下进行热重实验,并采用Kissinger、Flynn-Wall-Ozawa、C-R和普适积分