第一部分：巴曲亭及其有效成分止血机制的研究蛇毒中含有许多不同生物活性的酶类，有些酶类作用于血液凝固酶促级联反应过程中的一个或多个环节，可激活FⅤ、FⅦ、FⅨ、FⅩ、FⅡ或直接使纤维蛋白原凝集。很多蛇毒成分已运用于出血或血栓性疾病的诊断和治疗。蛇毒类凝血酶（Thrombin-like enzyme, TLE）为丝氨酸蛋白酶，是蝮亚科蛇毒中一个具有促凝血活性的组成成份，能直接作用于纤维蛋白原，促进血液凝固。不同来源的蛇毒类凝血酶对血浆纤维蛋白原的作用方式不同。根据类凝血酶作用于纤维蛋白原所得产物不同将其分为三类：①只释放纤维蛋白肽A，即SVTLE-A，如巴曲酶(bathroxobin)；②只释放纤维蛋白肽B，即SVTLE-B，如铜头蝮蛇毒类凝血酶(Trimeresurus okinavensis)；③既释放纤维蛋白肽A又释放纤维蛋白肽B，即SVTLE-AB，如巴西窝面蝰蛇毒（B.jararacussu venom）。巴曲亭（注射用蛇毒血凝酶）为巴西矛头蝮蛇（Bothrops atrox）毒液中分离出来的止血成份，包括两种有效成分：巴曲酶及少量凝血因子Ⅹ激活物（FⅩA）。巴曲酶直接作用于纤维蛋白原Aα链Arg16-Gly17处，释放纤维蛋白肽A后形成纤维蛋白单体Ⅰ，但不降解纤维蛋白B肽，亦不直接激活FⅩⅢ，因此不能形成稳定的纤维蛋白。FⅩA可以直接激活FⅩ，从而激活凝血酶原，使纤维蛋白原降解成纤维蛋白，并激活FⅩⅢ，形成稳定的纤维蛋白。巴曲亭已广泛用于神经外科、妇科与骨科手术，以及消化道与呼吸道出血，临床上有较满意的止血效果，但有关实验研究资料较少，至今尚无对出血性疾病的治疗方面的实验研究。目的：研究巴曲亭及其有效成分的止血机理及对出血性疾病的止血作用。方法：检测巴曲亭及其有效成分巴曲酶与凝血因子Ⅹ激活物（FXA）对正常人及出血性疾病患者血浆的活化部分凝血活酶时间（APTT）与凝血酶原时间（PT）的影响，用发色底物法检测FXA、巴曲酶及巴曲亭对凝血因子Ⅹ（FⅩ）活化及凝血酶生成的影响。结果：巴曲亭及其有效成分可以缩短正常人血浆的APTT，且在一定剂量范围内存在量效关系，并可纠正出血性疾病患者延长的APTT。FⅩA、巴曲酶及巴曲亭对PT无明显影响。FⅩA能促进FⅩ的活化及凝血酶的生成，巴曲酶及巴曲亭对二者无明显作用。结论：1.巴曲亭有明显的促进凝血的效果，并可纠正出血性疾病的止血异常。其有效成分巴曲酶直接作用于纤维蛋白原，而FⅩA通过活化FⅩ导致凝血酶的形成。2.巴曲亭可纠正血友病、VWD的止血异常，提示可成为出血性疾病新的治疗方法，但对无纤维蛋白原血症患者无效。从药理作用及实验结果看，巴曲亭不适用于无纤维蛋白原血症、纤溶亢进及弥散性血管内凝血引起的出血。第二部分：2例伴有巨大血小板减少和溶血性贫血的植物固醇血症的临床和基因研究植物固醇血症（Phytosterolemia），又称β-谷固醇血症，是一种罕见的常染色体隐性遗传性脂质代谢性疾病，至今仅有100例左右的报道，其主要表现为黄褐瘤、早发型冠心病、动脉粥样硬化及关节炎等。近年来发现有血液学尤其是巨大血小板减少伴溶血性贫血的血细胞改变，表明血液系统改变是植物固醇血症的一个新的亚型。最近我们遇到2例来自不同家系的患者表现为巨大血小板减少、溶血性贫血及脾肿大，同时血浆中植物固醇含量明显升高、ABCG5或ABCG8存在纯合突变。对这种伴有特征性血液学改变的植物固醇血症患者进行临床特性的研究，有助于临床医生正确的认识、诊断和治疗本病。目的：研究2例伴有巨大血小板减少和溶血性贫血的植物固醇血症患者的临床表型和基因诊断。方法：光学显微镜观察红细胞及血小板的形态；流式细胞仪（FCM）检测血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰ/Ⅸ和Ⅱb/Ⅲa；比浊法分析血小板聚集；高效液相色谱法（HPLC）检测血浆中豆固醇、二氢胆固醇和谷固醇；PCR结合测序分析患者ABCG5和ABCG8基因外显子和侧翼序列，寻找基因突变；同时用PCR-RFLP法分析基因多态性。结果：2例患者均有巨大血小板减少和溶血性贫血的表现，均伴有皮肤黄褐瘤和血液系统的改变。血浆中植物固醇尤其是谷固醇显著升高，是正常人30倍左右；基因分析发现2个突变，ins12283C、ISV7+3G>A，均为新的突变位点。结论：1.鉴定了2例植物固醇血症患者，患者均有巨大血小板减少和溶血性贫血，基因分析发现ins12283C、ISV7+3G>A两个国际上尚未报道的突变。2.植物固醇血症患者可作为巨大血小板减少伴或不伴溶血性贫血患者一个新的鉴别诊断。3.对血小板减少且常规治疗效果不佳的患者，应注意检查血细胞的形态，对巨大血小板减少伴有溶血性贫血的患者应考虑植物固醇血症可能。