两相分配生物反应器的构筑及其酮洛芬和扁桃酸的酶催化手性拆分研究

来源 :兰州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuhu986
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本学位论文详述了手性药物拆分技术的研究进展,构建了一种新型的两相分配生物反应器,并研究了该反应器中酮洛芬、扁桃酸两种手性药物的酶促不对称水解拆分。采用相转化法制备了包裹正己醇的聚砜微球PSF/Hexanol,并对酶促拆分底物酮洛芬和扁桃酸进行了吸附测试。结果表明PSF/Hexanol微球直径为2mm,微球内部含有大量的大孔和微孔结构,对正己醇的负载率能达到80.70%。同时PSF/Hexanol微球具有很好的吸附能力,在2.5小时内对不同初始浓度的酮洛芬和扁桃酸两种底物的吸附率分别达到98.75%和92.23%。成功合成了水溶性的羟甲基磺酸钠酯(EKS),采用PSF/Hexanol微球、游离猪胰脂肪酶,以磷酸缓冲液(KPB)为反应介质,构筑了两相分配生物反应器(TPPB),并催化了EKS的不对称水解反应,得到光学活性的产物(S)-酮洛芬。分别考察了pH、时间、底物浓度、PSF/Hexanol微球加入量对反应转化率(C)及对映体过量百分率(ee)的影响,并将纯水相中的反应的结果与TPPB体系进行对比。结果表明,TPPB中反应在pH=7.5、反应时间为24h、底物浓度为2.5mg/ml、PSF/Hexanol微球加入量为0.5g/ml时反应条件最佳,而且TPPB中反应的转化率有明显的提高。采用PSF/Hexanol微球、固定化脂肪酶Novozyme435(Candida Antarctica Lipase B,CAL-B),以磷酸缓冲液(KPB)为反应介质,构筑了两相分配生物反应器(TPPB),催化了扁桃酸甲酯在该体系中的不对称水解反应,得到光学活性产物(R)-扁桃酸。分别考察了pH、时间、温度、底物浓度、PSF/Hexanol微球加入量对反应的转化率(C)及对ee值的影响,并将纯水相中反应的结果与TPPB体系进行对比。实验结果表明,TPPB中反应在pH=6、时间为24h、温度为40℃、底物浓度为30mg/ml、PSF/Hexanol微球加入量为0.3g/ml时反应条件最佳,且固定化酶Novozyme435在TPPB中酶对底物的立体选择性比在纯水相中好。本学位论文建立了一种新型的酶促手性拆分体系,一方面给酶提供了一个温和的催化环境,从而保持其较高的活性;另一方面采用聚砜微球构建两相分配生物反应器,有利于产物的分离和收集,且聚砜微球可重复利用,降低了成本,在工业中具有一定的应用前景。
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