【摘 要】
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肿瘤是一类严重威胁人类健康的疾病.近年来尽管抗肿瘤药物已有了很大的发展,但仍存在着针对性差,杀伤正常细胞的毒副作用.因此研制出一种能够靶向性杀伤肿瘤细胞的基因工程药
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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肿瘤是一类严重威胁人类健康的疾病.近年来尽管抗肿瘤药物已有了很大的发展,但仍存在着针对性差,杀伤正常细胞的毒副作用.因此研制出一种能够靶向性杀伤肿瘤细胞的基因工程药物有重大的理论和实践意义.本组前期工作中利用EGF与EGFR结合的靶向性及腺病毒E4orf4蛋白的细胞毒性,通过基因重组及酵母表达技术,已设计并表达了一种新的融合蛋白EGF-E4orf4,前期的工作表明该融合蛋白对MDA-MB-231肿瘤细胞株有抑制作用,但尚存在EGF-E4orf4的酵母表达量低,纯化回收率低等问题.本论文在此基础上,对如何提高EGF-E4orf4的表达量及对其它肿瘤细胞的作用进行更深一步的探讨.本论文的第一部分工作是利用DNA重组技术,构建表达载体,并在大肠杆菌中表达融合蛋自MBP-E4orf4,经直链淀粉亲和柱层析得到较纯的融合蛋白,用此免疫新西兰白兔,获得了抗MBP-E4orf4的多克隆抗体,为以后鉴定酵母表达的EGF-E4orf4及细胞免疫荧光做准备.本论文的第二部分工作是提高融合蛋白EGF-E4orf4在酵母中的表达量.通过选用酵母嗜性密码子,人工合成E4orf4的编码基因,构建由酵母嗜性密码子组成的EGF-E4orf4多拷贝酵母表达载体,转染蛋白酶A缺陷型Pp酵母菌株SMD1168,优化表达条件.实验结果显示:酵母嗜性融合蛋白EGF-E4orf4的表达量达13mg/L,产量较以前提高了50%.最后一部分工作是进一步研究融合蛋白EGF-E4orf4的生物学功能.综合这些实验结果,可以看出融合蛋白EGF-E4orf4确实可通过EGFR这个分子靶点的介导,特异地杀伤肿瘤细胞,与我们的实验设想相符,当然这还需要更多的细胞水平及动物实验加以证实.
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