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目的:通过建立大鼠热处理,HSP70抑制,PARP-1抑制以及肝脏缺血再灌注模型,研究肝脏缺血再灌注过程中HSP70及PARP-1的表达情况以及相关关系,并对大鼠肝脏缺血再灌注损伤过程中产生的保护作用机制进行研究。方法:实验选取雄性SD大鼠30只,体重在350g至400g之间,随机分为五组,每组6只;A组(假手术组):不施加任何处理因素,麻醉成功后开腹,直接取肝脏组织及血液标本;N组(热处理组):手术前1小时将大鼠置于40℃水浴箱中行热处理,麻醉后按照Pringle’s法分别建立缺血再灌注模型,造模成功后取肝脏组织及血液标本;B组(缺血再灌注组):麻醉成功后按照Pringle’s法分别建立缺血再灌注模型,造模成功后取肝脏组织及血液标本;O组(HSP70抑制组):手术前1小时经腹腔注射槲皮素溶液(100mg/kg),热处理同N组,麻醉成功后再按照Pringle’s法建立肝脏缺血再灌注模型,造模成功后取肝脏组织及血液标本;P组(PARP-1抑制组):手术前5天每天经腹腔注射AG14361(10mg/kg),手术前1小时热处理同N组,麻醉成功后再按照Pringle’s法建立肝脏缺血再灌注模型。分析大鼠血清生化指标,HE染色观察肝脏组织病理形态学改变,Western blot检测HSP70与PARP-1的表达量,免疫荧光观察HSP70与PARP-1的表达位置,免疫共沉淀检测HSP70与PARP-1的关系。结果:1.血清ALT、AKP检测:A组ALT、AKP值最低,B组ALT、AKP值最高,N组、O组、P组ALT、AKP值介于A组与B组之间;B组高于N组、A组、O组、P组,差异具有统计学意义(p<0.05),N组低于B组、O组、P组,差异具有统计学意义(p<0.05),O组与P组ALT、AKP差异不具有统计学意义(p>0.05)。2.HE染色:A组(假手术组):肝组织结构正常;肝细胞无水肿、变性,未见细胞坏死;B组(缺血再灌注组)肝细胞结构紊乱,水肿明显,大片变性坏死;N组、O组、P组肝组织结构、肝细胞均具有不同程度的损伤,损伤程度介于A组、B组两者之间,且N组损伤程度较O组和P组轻,O组与P组损伤程度相当。3.Westren blot检测:通过提取肝脏细胞核蛋白,检测各组中HSP70与PARP-1的表达,各组均检测到HSP70、PARP-1蛋白的表达,统计分析示:N组HSP70蛋白表达量最高,O组HSP70蛋白表达量最低,A组、B组、P组胞核中HSP70蛋白的表达量介于N组与O组之间;N组比A组、B组、O组、P组表达高,差异具有统计学意义(p<0.05);A组与O组比较,差异不具有统计学意义(p>0.05);B组与P组比较,差异不具有统计学意义(p>0.05)。N组PARP-1蛋白表达量最高,P组PARP-1蛋白表达量最低,A组、B组、O组胞核中PARP-1蛋白的表达量介于N组与P组之间;N组比A组、B组、O组、P组表达量高,差异具有统计学意义(p<0.05);A组与P组比较,差异不具有统计学意义(p>0.05),B组与O组比较,差异不具有统计学意义(p>0.05)。表明了热处理,缺血再灌注均可诱导HSP70、PARP-1表达,槲皮素抑制了HSP70的表达,AG14361抑制了PARP-1的表达。4.免疫荧光检测:各组肝脏组织在荧光显微镜下观察,均可以观察到细胞核被DAPI染液染色后呈现出蓝色;绿色荧光信号为FITC标记的HSP70蛋白,胞浆和胞核区域均可见绿色荧光信号,胞浆与胞核均有HSP70的表达;红色荧光信号为CY3标记的PARP-1蛋白,PARP-1蛋白主要在细胞核中表达,提示HSP70可能进入细胞核与PARP-1结合。5.免疫共沉淀检测:提取HSP70与PARP-1高表达的N组肝细胞核蛋白,用HSP70抗体行免疫沉淀后,再对沉淀物行Western blot分析:在70KDa和110KDa左右出现目标带,为HSP70和PARP-1蛋白,证实了HSP70与PARP-1结合物的存在,热处理及缺血再灌注等应激后,HSP70与PARP-1结合发挥保护作用。结论:热处理,缺血再灌注诱导HSP70及PARP-1表达上调能减轻肝脏缺血再灌注损伤,此保护机制可能与HSP70及PARP-1共定位于细胞核有关。