论文部分内容阅读
目的：探讨海马甾醇提取物对小鼠生殖系统的影响及机制,为合理有效的利用海马等中药材提供理论依据。s方法：1首先选取动物甾醇对照品胆甾醇为标准,绘制标准曲线。然后按提取温度、提取时间、料液比三个单因素试验方案,用索氏抽提仪提取海马甾醇。皂化后,按香草醛-高氯酸显色法测定该样品吸光度。根据胆甾醇的标准曲线,计算出6个梯度样品中的总甾醇提取量,选出每个因素的最优提取条件。最后根据响应面设计,推算出最优化的提取条件,并以实验印证。2用高效液相色谱仪,以乙腈、水、异丙醇为洗脱剂,分离所提取的海马甾醇成分。3取72只ICR级健康雄性小鼠,平均分为4组,分别为对照组(0.9%生理盐水)、低剂量组(1mg/ml)、中剂量组(3mg/ml)、高剂量组(5mg/ml)。每组内的18只再随机分为3小组,分别灌喂10d、20d、30d后处死。(1)分析各组小鼠脏器系数的变化(2)用CASA精子系统分析精子质量(3)测定小鼠体内的睾酮T、促黄体生成素LH、促卵泡激素FSH、高密度脂蛋白胆固醇HDL-c、低密度脂蛋白胆固醇LDL-c.乳酸脱氢酶LDH、碱性磷酸酶AKP、酸性磷酸酶ACP的活性(4)利用显微镜观察小鼠睾丸和肾脏组织的结构变化(5)运用荧光定量PCR技术,检测小鼠睾丸内StAR, P450scc、P45017以及P450arom的表达量变化。结果：1通过响应面分析,得到数据模型：海马总甾醇提取量(mg/g)=4.85+0.38xA+0.74xB+0.62xC+0.32xAxB+0.17xAxC+0.40xBxC-0.78xA2-0.63xB2-0.10xC2(R2=0.9722),其中A为提取温度/℃,B为提取时间/h,C为料液比/m1·g-1。确定了最有提取方法为：提取温度：79℃,提取时间：7.7h,料液比：80ml/g,甾醇提取量：5.01mg/g。2通过高效液相色谱分析,确定其甾醇物质的分离条件。流动相选为23%乙腈,70%水和7%异丙醇。3海马甾醇提取物对小鼠的体重、脏器系数无显著性影响。4海马甾醇在一定程度上可显著增加小鼠精子浓度,高浓度的甾醇在灌喂初期对精子的促进作用相对较弱。5通过酶活力检测发现海马甾醇提取物能够影响小鼠体内的激素水平,对T、LH、HDL-c等有促进作用；对FSH、LDL-c、LDH的影响作用不明显；对ACP、AKP的影响机制较复杂,需进一步研究。6通过睾丸和肾脏的HE染色切片观察,发现海马甾醇提取物可改变小鼠睾丸曲细精管结构,增加精原细胞层数,增加各级精细胞、睾丸间质细胞和成熟精子的数目,促进精子的形成。但长期高剂量的摄取海马甾醇提取物后,对小鼠睾丸和肾脏的结构有一定的改变,可能存在慢性毒性作用。7通过荧光定量PCR发现,中低剂量的海马甾醇提取物能够增加StAR、P450scc和P450c17的基因表达,抑制P450arom的合成,增加小鼠体内睾酮激素含量,进一步增加小鼠精子的合成和分泌。结论：1海马甾醇对小鼠无急性毒性作用,对精子浓度促进作用明显。2长期高浓度的海马甾醇摄入对机体有一定的损伤作用。3海马甾醇可提高甾体激素相关基因表达量,从而影响小鼠体内激素水平,最后通过酶活力调控精子的发生。