【摘 要】
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目的:观察lncRNA LINK-A在脑胶质瘤中的表达和临床意义,并探讨lncRNA LINK-A影响脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的信号机制。方法:1.收集2014年至2016年河北医科大学附属第二医院神
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目的:观察lncRNA LINK-A在脑胶质瘤中的表达和临床意义,并探讨lncRNA LINK-A影响脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的信号机制。方法:1.收集2014年至2016年河北医科大学附属第二医院神经外科I-IV级脑胶质瘤及癌旁组织各88例。采用RTFQ-PCR检测脑胶质瘤组织与癌旁组织lncRNA LINK-A表达差异,免疫组织化学染色分析脑胶质瘤组织与癌旁组织c-myc表达差异,Pearson法分析脑胶质瘤组织中lncRNA LI NK-A与c-myc的相关性,Log-rank检验比较lncRNA LINK-A和c-myc低表达与高表达患者3年总体生存率差异。2.以脑胶质瘤U251细胞作为研究对象,慢病毒转染法构建lncRNA LINK-A过表达细胞株(LINK-A OV)和空载细胞株(NC),同时设立正常细胞作为空白对照(Blank),在必要时以Rho A活性抑制剂Rhosin或Rock抑制剂GSK429286A预处理细胞。MTT法检测各组细胞活力,结晶紫染色考察各组细胞增殖能力,侵袭小室实验检测各组细胞侵袭能力,Pull-Down实验检测各组细胞Rho A活性,蛋白印记法检测各组Rho A、Rock1、c-myc和Akt蛋白表达。结果:1.临床数据显示,lncRNA LINK-A在脑胶质瘤组织中表达上调(P<0.01),与Ⅰ+Ⅰ级脑胶质相比,lncRNA LINK-A在Ⅲ+Ⅲ级脑胶质瘤中表达更高(P<0.01)。c-myc在癌旁组织中弱阳性表达,在Ⅰ+Ⅰ级脑胶质瘤组织中阳性表达,在Ⅲ+Ⅲ级脑胶质瘤组织中强阳性表达。在脑胶质瘤组织中lncRNA LINK-A与c-myc呈强正相关(r=0.7545,P<0.01)。相较于低表达患者,lncRNA LINK-A或c-myc高表达患者3年总体生存率均降低(P<0.01)。2.体外研究显示,lncRNA LINK-A过表达明显增强U251细胞增殖和侵袭能力(P<0.01)。lncRNA LINK-A过表达能增强Rho A蛋白活性,同时上调Rock1、c-myc及Akt蛋白表达(P<0.01)。Rhosin(2μM)或GSK429286A(0.5μM)预处理均能显著降低lncRNA LINK-A过表达诱导的细胞增殖和侵袭活动(P<0.01)。Rhosin预处理可降低lncRNA LINK-A过表达诱导的Rho A蛋白活性增强和Rock1、c-myc及Akt蛋白表达上调(P<0.01)。GSK429286A预处理显著抑制lncRNA LINK-A过表达诱导的c-myc和Akt蛋白表达上调(P<0.01)。结论:1.lncRNA LINK-A和c-myc在脑胶质瘤组织中表达升高,并与肿瘤分级和不良预后相关。2.lncRNA LINK-A可能通过Rho A/Rock1信号通路上调c-myc和Akt蛋白表达,从而促进脑胶质瘤细胞增殖和侵袭。
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