西花蓟马肠道细菌多样性分析

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西花蓟马Frankliniella occidentalis(Perganda)是一种重要入侵害虫。该虫具有体型小、繁殖力强、世代周期短、隐蔽性强、及杂食性等特点,使得西花蓟马在各地快速定殖,迅速爆发。西花蓟马不仅可直接进行取食和产卵危害,使叶片皱缩、花瓣褪色、果实形成伤疤,还可间接传播番茄斑萎病毒(TSWV)和凤仙花坏死病毒(INSV)等多种病毒,对世界各地对蔬菜、花卉和农作物造成了严重的危害。西花蓟马的严重为害和其杂食特性有关,即西花蓟马除取食植物外还可以取食花粉花蜜,花粉花蜜对西花蓟马种群的增长有明显的促进作用,取食不同食物的西花蓟马,其与体内的肠道细菌是否相同?本研究采用16S rDNA基因文库技术和Illumina MiSeq测序技术分析了西花蓟马取食月季花、菜豆豆荚和菜豆叶片3种食物后其肠道细菌的组成及多样性,比较了不同抗生素对西花蓟马肠道细菌的去除效果,以及去除肠道细菌后对西花蓟马生长发育和繁殖的影响。以期为了解西花蓟马肠道细菌功能研究提供理论依据,同时为西花蓟马的防治提供新的思路,主要研究结果如下:1.西花蓟马取食不同食物后肠道细菌的多样性比较为明确西花蓟马成虫取食月季花、菜豆豆荚和菜豆叶片3种食物后其肠道细菌的组成和多样性,通过16S rDNA(V3+V4)可变区在Illumina Miseq平台进行测序。结果表明,通过OTUs在各分类阶元上注释,取食月季花的西花蓟马(FF)肠道细菌注释得到数目最多,分别有17个门,41个纲,66个目,87个科,89个属。取食菜豆叶片的西花蓟马(LF)次之,取食菜豆豆荚的西花蓟马(PF)注释得到最少数目。取食3种不同食物西花蓟马肠道细菌种群α多样性分析表明PF的Chao和Ace指数最大,分别为1569.40和1609.27,说明在PF中菌群丰度最高;FF中Simpson指数最大为0.96,PF为0.82、LF为0.77,说明FF中菌群多样性最高。在种类组成上,西花蓟马取食月季花、菜豆豆荚和菜豆叶片肠道优势菌在门水平上均为变形菌门Proteobacteria,相对丰度分别为84.08%、95.58%和95.33%,次优势菌群均为放线菌门Actinobacteria,相对丰度分别为3.63%、3.04%和2.42%;属水平上取食菜豆豆荚(PF)和菜豆叶片(LF)优势菌群为寡养单胞菌属Stenotrophomonas;取食月季花(FF)优势菌群为Rosenbergiella,次优势菌群为泛生菌属Pantoea。KEGG pathway注释预测出西花蓟马成虫肠道细菌基因功能涉及碳水化合物代谢和氨基酸代谢。2.三种抗生素对西花蓟马存活率及肠道可培养细菌的影响为阐明抗生素对西花蓟马的作用,选用氨苄青霉素AMP、氯霉素CAP和硫酸链霉素SM等3种抗生素分别采用薄膜饲喂法和叶片浸渍法处理西花蓟马,研究了3种抗生素对西花蓟马死亡率及对肠道可培养细菌的影响。结果表明抗生素对西花蓟马的死亡率有明显的影响,随着浓度的增加和处理时间的延长死亡率升高,在薄膜饲喂法和叶片浸渍法处理下,西花蓟马均是在3种抗生素浓度为50.00 mg/mL处理72 h时死亡率最大,薄膜饲喂法对西花蓟马死亡率的影响高于叶片浸渍法。在2种饲喂方式下,25.00 mg/mL氨苄青霉素和50.00mg/mL硫酸链霉素处理72 h后对西花蓟马肠道内可培养细菌的去除效果最好。浓度为50.00 mg/mL氯霉素在薄膜饲喂法中处理24 h后对西花蓟马肠道细菌去除效果最好,但叶片浸渍法没有明显作用。结果说明西花蓟马死亡率及肠道细菌的去除效果与抗生素种类、浓度和处理时间相关,也与处理方法有关。3.肠道细菌对西花蓟马生长发育和繁殖的影响为明确肠道细菌对西花蓟马生长发育及繁殖的影响。利用25 mg/mL氨苄青霉素去除西花蓟马肠道细菌后,观察西花蓟马生长发育以及繁殖的变化。结果发现抗生素可不同程度去除西花蓟马1龄、2龄和蛹期肠道可培养细菌。去除西花蓟马肠道细菌后1龄若虫和预蛹时发育时间明显短于对照,2龄若虫发育时间延长0.71 d,未成熟期没有显著变化。去除肠道细菌后导致西花蓟马产卵提前1.15 d,雌成虫寿命延长,产卵量相比对照降低了25.53粒。结果证实肠道细菌对不同龄期的西花蓟马虫态历期有一定影响,但对未成熟期没有明显影响,对西花蓟马繁殖有一定的促进作用。
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