蛋白酶体抑制剂Lactacystin对宫颈癌Hela细胞体外作用的实验研究

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目的:探讨蛋白酶体抑制剂Lactacystin对宫颈癌Hela细胞存活率的影响,并初步探讨其可能的机制,为宫颈癌治疗研究提供新的理论思路与实验依据。方法:MTT、Hoechst 33342染色检测蛋白酶体抑制剂Lactacystin对宫颈癌Hela细胞体外生长、增殖及凋亡的影响;并用Western Blot、RT-PCR检测细胞损伤中相关信号及基因表达水平的变化。结果:(1)MTT检测结果显示:与对照组相比,LAC 1.25μM组(86.5±0.09(%))、LAC 2.50μM组(65.4±0.1(1%))、LAC 5.00μM组(52.3±0.15(%))、LAC 10.00μM组(40.2±0.12(%))及LAC 20.00μM组(22.9±0.13(%))Hela细胞增殖率明显降低(P<0.05)。(2)Hoechst 33342染色结果表明:随着LAC浓度的升高,作用后染色质凝集、细胞核发生回缩、核分裂更加明显,而对照组Hela细胞核完整,染色质呈弥散均匀分布。(3)Western Blot检测结果表明:随着LAC浓度的增高,Bcl-2蛋白表达逐渐减弱,而Bax蛋白表达逐渐增强,与对照组相比,在10.00μM浓度时Bax/Bcl-2蛋白比值明显增高(P<0.05),同时,随着LAC浓度的增高,Caspase-3蛋白表达逐渐增强(P<0.05)。(4)RT-PCR电泳结果显示,与对照组相比,随着LAC浓度的增加,Caspase-3 mRNA的表达明显增加,Bcl-2 mRNA的表达逐渐减少,而Bax mRNA的表达明显增加, Bax/Bcl-2mRNA比值的增加则更为明显(P<0.05)。结论:(1)蛋白酶体抑制剂Lactacystin能够体外抑制宫颈癌Hela细胞增殖。(2)蛋白酶体抑制剂Lactacystin能够体外诱导宫颈癌Hela细胞凋亡。(3)蛋白酶体抑制剂Lactacystin可能主要通过线粒体途径诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,其机制与上调Bax/bcl-2比值及Caspase-3表达密切相关。(4)抑制蛋白酶体功能对宫颈癌Hela细胞有明显体外增殖抑制及诱导凋亡作用。总之,通过体外实验,证实了蛋白酶体抑制剂Lactacystin对宫颈癌Hela细胞具有增殖抑制及诱导凋亡作用,可能主要通过线粒体途径诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,具体机制与上调Bax/bcl-2比值及Caspase-3表达密切相关。
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