研究背景在案件调查过程中,案发现场残留的组织体液来源对于帮助刑侦人员重建犯罪现场、推断犯罪经过具有重要作用,可为警方判定犯罪性质提供重要线索。传统的体液斑鉴定方法如免疫法、生物化学等,其方法特异性较弱,灵敏度较差;基于RNA分子的检测方法虽然特异性较好,但对实验检测条件和检材条件要求较高,无法广泛应用于一般的法医检案工作中。基于DNA甲基化的体液斑推断方法拥有高灵敏度、强特异性的优势,并且能与一般的法医DNA实验室的工作平台相兼容,因此是现场检材检验方法中一个很好的选择。相关研究表明,大量的组织特异性差异化甲基化区域（tissue-specific differentially methylated regions,t DMRs）存在于人类基因组中,通过检测这些区域的甲基化水平可以帮助推断识别不同的人体组织。然而,由于不同群体间存在一定的甲基化差异,特异性甲基化的体液交叉等因素,已在其他人群报道的甲基化标记可能不太适用于本地人群的体液鉴定。因此有必要对目前已报道的DNA甲基化标记在中国人群中的体液特异性进行进一步分析和验证,建立适合中国人群的DNA甲基化复合检测体系,评估其法医学应用价值。本项目前期研究对国外报道的体液鉴定甲基化甲基化标记在中国人群进行了体液特异性验证,初步筛选出了十个在中国人群具有较强体液特异性的DNA甲基化标记。本论文研究拟建立基于十个体液特异性甲基化标记的复合检测体系,在大量体液样本中进一步验证这些标记的体液特异性,采用随机森林模型分析方法,研究其推断体液斑组织来源的法医学价值。目的本研究旨在建立一种新的基于十个甲基化标记的复合检测体系,研究其在中国人群进行体液斑鉴定的法医学价值。方法基于课题组前期已筛选出的十个体液特异性甲基化Cp G标记,本研究通过建立甲基化SNa Pshot复合检测体系,对265例中国汉族人群的体液斑样本（精液50例、血液55例、唾液52例、阴道分泌物56例、月经血52例）进行检测,获取十个Cp G位点在本地人群体液样本的甲基化水平,基于群体样本甲基化数据建立体液推断的随机森林模型,验证该模型推断体液斑组织来源的准确性,检验该复合检测体系和随机森林分析方法推断单一体液斑组织来源的灵敏度,检验该方法推断混合体液样本、陈旧样本组织来源的能力。结果本研究成功建立了十个体液特异性甲基化标记的SNa Pshot复合检测体系,检测所有体液样本的十个甲基化标记,均能获得良好的分型效果。十个标记的甲基化水平在所有样本具有较强的体液特异性。基于测试集样本甲基化数据建立的体液推断随机森林模型对测试样本的判断准确率高达100%（185/185）,对验证样本的推断准确率高达97.5%（78/80）,全部样本的判断准确率高达99.25%（263/265）。另外,该模型成功预测精液、血液、唾液、阴道液和月经血的概率平均值分别高达0.99、0.99、1.0、0.98和0.83。该检测分析方法可准确地从低至0.5 ng DNA样本、长达6个月的陈旧性样本中分别获取良好的甲基化分型图谱和数据,并对样本组织来源做出准确的判断。另外,该检测分析方法也能够从混合比例低至1:20的混合样本获得清晰的甲基化分型图谱,并能够对混合比例低至1:5的混合样本的组织来源做出准确的判断。结论本研究建立的一种新的体液特异性甲基化复合检测体系和体液推断随机森林模型,对于法医体液斑单一样本、陈旧样本、混合样本的组织来源推断具有较高的准确性和灵敏性,为法医体液斑的组织来源推断提供了一种新的检测分析方法,具有较好的法医学价值。