大肠癌是人类常见恶性肿瘤之一，在全世界范围内，年发病超过500，000人。大肠癌的发病率仅次于肺癌和胃癌的发病率,居癌症发病率的第3位。目前我国大肠癌发病率占恶性肿瘤的第4或第5位（女性为第4位，男性为第5位），发病率与以前相比较，有明显上升趋势。虽然近年来对大肠癌的诊断、治疗水平都有所提高，但大肠癌根治术后五年生存率一直徘徊在50%－55%左右，人群死亡率自1973年的2.37/10万升至1993年的8.61/10万。目前,对大肠癌的治疗方法为“手术+放疗+化疗”。常规“手术+化疗+放疗”后，患者平均生存11个月。大肠癌肝转移的病人预后非常差，其中位生存期6-9个月，运用5-FU化疗生存期可以增加到12个月。尽管使用如Irinotecan和Oxaliplatin（草酰铂）等新型化疗药物可以稍微提高生存率，但是化疗仅仅是治标。肿瘤病灶扩散已侵及肝门等重要脏器结构的，是外科手术的禁忌证。大肠癌浸润性生长，外科手术不能全部切除，且不能阻止肿瘤的复发或转移。术前、术后放疗、化疗可能延迟会阴部切口的愈合、引起性功能障碍、吻合口裂开、小肠梗阻和由放射性肠炎引起的迟发性腹泻等多种并发症，对长期生存率影响不大。近年来，基因治疗也因载体技术的限制，不能广泛应用于临床，大多数生物反应调节剂治疗尚处于实验阶段,已经应用于辅助治疗者为少数。因此，彻底根治大肠癌是目前亟待解决的问题。国内外学者公认，恶性肿瘤的发生与细胞中癌基因和抑癌基因的表达异常有关。诱导分化疗法可通过抑制癌基因表达、激活抑癌基因的表达，从而达到促进肿瘤细胞向高分化方向转化，降低恶性度，控制其转移和复发的目的。因此，诱导分化疗法及其机理的研究，是目前抗大肠癌研究的一个热点。 近年来研究表明，每种有效的诱导分化剂都可促进肿瘤细胞向高分化方向转化，一定程度地抑制肿瘤细胞侵袭和复发，但又都达不到使肿瘤细胞完全正常分化及避免肿瘤复发的目的。进而，对不同作用方式的诱导分化剂联合应用，根据其作用机理不同，利用其协同作用或互补作用，增强诱导分化剂的抗癌能力，这一课题又成为新的研究方向。显然，对每一诱导分化剂的作用机理进行透彻研究是实现联合用药的前提条件。 <WP=104>苯乙酸在体内可特异地结合血浆中肿瘤细胞生存所依赖的谷氨酰胺，因而于1971年被提出可作为潜在的抗肿瘤的诱导分化剂。20世纪九十年代,国内外先后开展了对PA诱导肿瘤细胞转化的作用机理的研究。作用机理方面的研究包括：PA通过抑制TGF-β2（transforming growth factor-beta2）基因的表达，对肿瘤细胞DNA、RNA合成抑制，对蛋白合成抑制，进而对甲羟戍酸合成通路进行抑制（MVA通路）；可通过RA(视黄酸)通路起作用；抑制C-myc基因表达。有学者认为不同的细胞类型和药物剂型可导致PA的作用方式(通路)不同。 目前，苯乙酸已被美国食品药品总局批准，正在进行一期和二期临床试验。二甲基甲酰胺（Dimethylformamide，DMF）作为一种诱导分化剂，研究始于20世纪七十年代。1979年，Dexter等首先报道了DMF对结肠癌细胞系诱导细胞分化的体外实验研究。通过对集落形成率的测定，证实DMF能够使培养的人结肠癌细胞向低度恶性转化。此后，国外学者开始对DMF诱导肿瘤细胞分化的作用机理进行了探讨。研究发现，DMF可使正常结肠粘膜粘附蛋白（colonic mucoprotein antigen，CMA）增加，肿瘤CMA减少，癌胚抗原carcinoembryonic antigen，CEA）减少。以前研究还发现，DMF可使肿瘤细胞膜表面蛋白组成和电泳发生明显变化，进而促使肿瘤细胞向低恶性度转化，通过测定转化生长因子－β与经过DMF治疗的人结肠癌细胞MOSER或胞外基质的结合变化，发现DMF可使TGF-β与细胞结合增加2倍。进一步间接证明DMF诱导大肠癌细胞分化的作用。本实验选取癌基因C-myc和抑癌基因PTEN作为研究对象，测定了它们在大肠癌组织中的表达程度，结果表明C-myc在大肠癌组织中高度表达，C-myc表达程度与病理分级不相关。在癌组织中PTEN表达与C-myc表达呈负相关。进一步证实结直肠癌的发生和发展是一个有多种基因参与、相互作用的复杂过程。本实验应用[3H]-TdR掺入法、细胞计数法研究了诱导分化剂苯乙酸(PA)和二甲基甲酰胺 (DMF)对大肠癌细胞HCT-8增长能力的抑制作用。实验证实，PA和DMF在细胞水平对大肠癌细胞HCT-8的增殖有极强的抑制作用．PA和DMF对大肠癌细胞HCT-8存在时间和剂量依赖性增殖抑制作用。用药后，大肠癌细胞HCT-8每分钟同位素脉冲数 (CPM)明显降低，说明肿瘤细胞DNA合成总量明显减少。本实验应用流式细胞术(FCM) 反复观察了应用PA、DMF前后，大肠癌细胞HCT-8细胞周期各时相的动态变化。证实PA、DMF显著降低HCT-8细胞周期中G0/G1比例，显著提高了S期比例。结果表明：PA和DMF抑制大肠癌细胞HCT-8增殖的方式为抑制细胞周期G1<WP=105>期比例, 推测PA和DMF可能为直接作用于大肠癌细胞RNA合成的转录过程，进而间接抑制S期DNA的全部复制。本实验应用电子显微镜在亚细胞水平观察了PA对大肠癌细胞HCT-8超微结构的影响。应用PA前，大肠癌HCT-8细胞核的形状表现为胞核极不规整，核质比明显增大。本实验应用PA后，细胞核突触减少，已接近正常细胞，呈类圆形。