药物的荷移反应及药物与牛血清白蛋白相互作用的光谱法研究及应用

来源 :内蒙古大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:jimgui19810917
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头孢菌素类抗生素是目前世界上应用最广、发展最快的一类抗生素,临床使用量始终占抗生素的首位。荜茇宁(Piperlonguminine, PLG)是从荜茇中经提取分离得到的胡椒碱类衍生物,具有明显的降血脂作用,能有效测定PLG含量的方法较少。荷移分光光度法具有简便准确、专属性强和灵敏度高等优点,在药物分析方面展示出了很好的应用前景。药物分析工作不仅包括对药物含量的测定还包括药理药效的研究,从分子水平上研究药物与血清蛋白的相互作用,不仅有助于理解药物的转运、代谢过程,还可以为设计与开发高活性药物提供更多有价值的信息。本论文工作以头孢菌素类抗生素及蒙药荜茇宁为研究对象,进行了分析测定方法的建立和药物与蛋白质相互作用的研究。论文工作首先以邻硝基苯基荧光酮(o-NPF)和二溴羟基苯基荧光酮(DBH-PF)作为电子受体分别与头孢唑啉(CFZ)、头孢哌酮(CPZ)和PLG生成荷移络合物为基础,研究了o-NPF与CFZ、o-NPF与PLG荷移络合物的吸光光谱特性;DBH-PF与CPZ荷移络合物的吸光光谱、荧光光谱和共振瑞利散射光谱特性,优化了各荷移反应条件,并探讨了荷移反应机理。在o-NPF与CFZ荷移反应体系中,CFZ的浓度在4.545~172.72μg/mL范围内遵循比尔定律,表观摩尔吸光系数达5.41×104L·mol-1·cm-1,检出限为1.53μg/mL,用拟定方法测定了生物样品中CFZ含量,回收率在99.8%~100.9%之间,与文献报道的测定CFZ的方法相比灵敏度高,具有快速、简便和准确的特点。在o-NPF与PLG荷移反应体系中,PLG的浓度在0.0546~10.92μg/mL范围内遵循比尔定律,表观摩尔吸光系数高达6.571×104L·mol-1·cm-1,检出限为0.0153μg/mL,用本方法对生物样品中PLG的含量进行了测定,回收率在99.7%-100.0%之间,首次建立了测定蒙药PLG含量的荷移分光度法,具有准确、快速简便、灵敏度高的优点。在DBH-PF与CPZ反应体系中,由于生成了1:1的荷移络合物,导致体系的吸收光谱发生变化、荧光猝灭、共振瑞利散射(RRS)强度减弱,三种方法的线性范围分别为0.0668~0.6677μg/mL、0.03338~2.336μg/mL和0.03338~3.3383μg/mL,最低检出限分别为0.0226μg/mL、0.0116μg/mL和0.0132μg/mL,建立了测定注射剂及生物样品中CPZ含量的三种快速简便、准确的分析方法,通过与已有测定CPZ的方法进行比较,发现在选择性、灵敏度和测定范围等方面均有很大的改善。在药物与蛋白质相互作用方面,采用吸光光谱和荧光光谱法分别研究了头孢噻肟(CTX)及蒙药PLG与牛血清白蛋白(BSA)相互作用的光谱特性,得出两种药物对BSA的荧光猝灭皆为静态猝灭,求出不同温度下两者的结合速率常数、结合位点数、结合作用距离及相应的热力学参数,确定了两种药物与BSA之间的作用力类型,并用同步荧光光谱和三维荧光光谱法探讨了CTX对BSA构型变化的影响。研究工作还探讨了生物流离子Cu(Ⅱ)存在时对BSA及CTX-BSA荧光光谱特性及结合速率常数的影响,计算了Cu(Ⅱ)-BSA及Cu(Ⅱ)-CTX-BSA的结合常数和结合位点数,发现在Cu(Ⅱ)存在下,CTX对BSA的荧光静态猝灭作用显著增强,据此推断Cu(Ⅱ)可能作为CTX与BSA作用的桥梁,形成了CTX-Cu(Ⅱ)-BSA三元配合物。进一步研究了CTX、PLG两种药物同时存在时与BSA的相互作用情况,用标记竞争实验确立了两种药物与BSA的结合位置主要位于ⅡA亚域的Ⅰ位点,并根据三元体系的Hill值得出两种药物之间具有负协同作用。
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