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目的：研究特异性bFGF拮抗剂—FGFR1-Fc抑制碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）刺激的人视网膜微血管内皮细胞（HRCEC）增殖作用,以及FGFR1-Fc抑制OIR（oxygen-induced retinopathy）小鼠视网膜血管生成的机制研究。探讨FGFR1-Fc抑制bFGF刺激的HRCEC增殖相关的信号通路，FGFR1-Fc与雷珠单抗联合治疗对视网膜新生血管疾病的协同作用。
方法：用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测bFGF刺激HRCEC细胞活性。以bFGF刺激的HRCEC作为细胞模型,分为空白对照组、bFGF组、bFGF+FGFR1-Fc组、FGFR1-Fc组，用MTT法检测FGFR1-Fc对bFGF刺激的HRCEC细胞增殖的影响，用细胞划痕法检测FGFR1-Fc对bFGF刺激的HRCEC迁移能力的影响。用免疫印迹法（western blot，WB）检测ERK1/2及其磷酸化蛋白、P38及其磷酸化蛋白和AKT及其磷酸化蛋白的表达水平。将出生后第7天（P7）的C57BL/6新生鼠与其母鼠一起暴露于的75％氧气中，并在P12返回室内空气，随后将这些新生鼠随机分组：正常氧组、OIR+NS组、OIR+FGFR1-Fc组、OIR+雷珠单抗组、OIR+FGFR1-Fc+雷珠单抗组，分别在P12用药物进行玻璃体腔注射治疗后，再返回于空气中喂养5天。P17用异硫氰酸葡聚糖荧光素溶液（FITC-dextran）左心室灌注后处死小鼠，取双眼进行荧光显微镜观察视网膜血管状态及视网膜无灌注区面积，数码照相机拍片。同样的以OIR小鼠为动物模型，P17摘除双侧眼球进行制备眼球组织石蜡，包埋，采用苏木精－伊红染色（HE染色）方法检查各组小鼠视网膜血管新生情况,计数突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数目。
结果：MTT结果显示，在一定范围浓度内的bFGF作用下促进了HRCEC增殖，并且FGFR1-Fc处理后抑制了bFGF(20ng/ml)刺激的HRCEC增殖。FGFR1-Fc浓度为500μg/ml时，对HRCEC抑制率为33%。细胞划痕实验结果显示，bFGF(20ng/ml)作用下HRCEC迁移距离增大，FGFR1-Fc处理后减小了bFGF刺激的HRCEC迁移距离。WB实验结果显示,bFGF上调ERK1/2、P38和AKT的磷酸化水平，FGFR1-Fc处理后，ERK1/2、P38和AKT的磷酸化水平显著降低。视网膜铺片显微镜结果表明：FGFR1-Fc处理后视网膜无灌注区面积减少，FGFR1-Fc和雷珠单抗共同处理后视网膜无灌注区面积减小范围大于FGFR1-Fc组。组织病理学检查结果显示，OIR+NS组、OIR+FGFR1-Fc组、OIR+雷珠单抗组和OIR+FGFR1-Fc+雷珠单抗组突入玻璃体腔的血管内皮细胞核数分别为(19.95±3.137)、(9.85±2.39)、(7.3±4.646)和(2.7±1.867)个。其中OIR组突入玻璃体腔新生血管内皮细胞核数显著高于OIR+FGFR1-Fc组、OIR+雷珠单抗组和OIR+FGFR1-Fc+雷珠单抗组。OIR+FGFR1-Fc+雷珠单抗组突入玻璃体腔新生血管内皮细胞核数显著低于OIR+FGFR1-Fc组、OIR+雷珠单抗组。
结论：FGFR1-Fc可抑制bFGF刺激的HRCEC细胞的增殖。FGFR1-Fc通过下调PI3K/AKT、ERK1/2和P38MAPK信号通路,从而抑制HRCEC的增殖,抑制视网膜新生血管的形成。FGFR1-Fc可减少OIR小鼠模型视网膜中无灌注区的面积和视网膜新生血管核数，FGFR1-Fc与雷珠单抗可能存在协同作用，从而抑制视网膜新生血管生成。
方法：用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测bFGF刺激HRCEC细胞活性。以bFGF刺激的HRCEC作为细胞模型,分为空白对照组、bFGF组、bFGF+FGFR1-Fc组、FGFR1-Fc组，用MTT法检测FGFR1-Fc对bFGF刺激的HRCEC细胞增殖的影响，用细胞划痕法检测FGFR1-Fc对bFGF刺激的HRCEC迁移能力的影响。用免疫印迹法（western blot，WB）检测ERK1/2及其磷酸化蛋白、P38及其磷酸化蛋白和AKT及其磷酸化蛋白的表达水平。将出生后第7天（P7）的C57BL/6新生鼠与其母鼠一起暴露于的75％氧气中，并在P12返回室内空气，随后将这些新生鼠随机分组：正常氧组、OIR+NS组、OIR+FGFR1-Fc组、OIR+雷珠单抗组、OIR+FGFR1-Fc+雷珠单抗组，分别在P12用药物进行玻璃体腔注射治疗后，再返回于空气中喂养5天。P17用异硫氰酸葡聚糖荧光素溶液（FITC-dextran）左心室灌注后处死小鼠，取双眼进行荧光显微镜观察视网膜血管状态及视网膜无灌注区面积，数码照相机拍片。同样的以OIR小鼠为动物模型，P17摘除双侧眼球进行制备眼球组织石蜡，包埋，采用苏木精－伊红染色（HE染色）方法检查各组小鼠视网膜血管新生情况,计数突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数目。
结果：MTT结果显示，在一定范围浓度内的bFGF作用下促进了HRCEC增殖，并且FGFR1-Fc处理后抑制了bFGF(20ng/ml)刺激的HRCEC增殖。FGFR1-Fc浓度为500μg/ml时，对HRCEC抑制率为33%。细胞划痕实验结果显示，bFGF(20ng/ml)作用下HRCEC迁移距离增大，FGFR1-Fc处理后减小了bFGF刺激的HRCEC迁移距离。WB实验结果显示,bFGF上调ERK1/2、P38和AKT的磷酸化水平，FGFR1-Fc处理后，ERK1/2、P38和AKT的磷酸化水平显著降低。视网膜铺片显微镜结果表明：FGFR1-Fc处理后视网膜无灌注区面积减少，FGFR1-Fc和雷珠单抗共同处理后视网膜无灌注区面积减小范围大于FGFR1-Fc组。组织病理学检查结果显示，OIR+NS组、OIR+FGFR1-Fc组、OIR+雷珠单抗组和OIR+FGFR1-Fc+雷珠单抗组突入玻璃体腔的血管内皮细胞核数分别为(19.95±3.137)、(9.85±2.39)、(7.3±4.646)和(2.7±1.867)个。其中OIR组突入玻璃体腔新生血管内皮细胞核数显著高于OIR+FGFR1-Fc组、OIR+雷珠单抗组和OIR+FGFR1-Fc+雷珠单抗组。OIR+FGFR1-Fc+雷珠单抗组突入玻璃体腔新生血管内皮细胞核数显著低于OIR+FGFR1-Fc组、OIR+雷珠单抗组。
结论：FGFR1-Fc可抑制bFGF刺激的HRCEC细胞的增殖。FGFR1-Fc通过下调PI3K/AKT、ERK1/2和P38MAPK信号通路,从而抑制HRCEC的增殖,抑制视网膜新生血管的形成。FGFR1-Fc可减少OIR小鼠模型视网膜中无灌注区的面积和视网膜新生血管核数，FGFR1-Fc与雷珠单抗可能存在协同作用，从而抑制视网膜新生血管生成。