【摘 要】
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目的:目前用于检测HBV的荧光定量PCR产品所需检测时间较长,成本较高,本实验拟利用二聚体蝎型荧光探针技术建立一种能广泛应用于临床的快捷、价格低廉、敏感、特异和稳定性较
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目的:目前用于检测HBV的荧光定量PCR产品所需检测时间较长,成本较高,本实验拟利用二聚体蝎型荧光探针技术建立一种能广泛应用于临床的快捷、价格低廉、敏感、特异和稳定性较好的新型HBV实时荧光定量PCR检测方法。方法:根据HBV基因组保守区域设计二聚体蝎型荧光探针和引物,采用基因克隆技术,将目的片段插入到载体pMD18-T中,获得含有该基因片段的克隆质粒,以此作为标准品。优化荧光定量PCR条件,建立以二聚体蝎型荧光探针技术为平台的实时荧光定量PCR方法,并对所建立的方法进行方法学评价。最后用该方法对临床收集疑为乙型肝炎病毒感染的患者血清标本进行检测并和Taqman-FQ-PCR方法进行比较。结果:1)成功构建了重组质粒pMD18-T-HBV-Precore/core;2)建立了以二聚体蝎型荧光探针技术为基础的实时荧光定量PCR方法,其线性检测范围为10~2～10~9copies/μl;灵敏度为10copies/μl;高拷贝样品的天间CV为3.86%、批内CV为3.00%,低拷贝样品的天间CV为2.57%、批内CV为1.71%;特异性好;3)通过初步临床应用发现,所建立的FQ-PCR方法与已商品化的Taqman-FQ-PCR方法相比,不仅具
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