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目的以0.1%PTU溶液灌胃复制的甲减阳虚证模型大鼠为研究对象,观察模型大鼠肾脏形态结构、甲状腺功能、肾功能的变化和右归丸的干预作用,从分子水平探讨甲减肾损伤的发病机制及右归丸对其保护的作用机制与TGF-β/Smad信号通路的相关性,为中医药防治甲减肾损伤提供实验依据,传承并挖掘古方的应用价值。方法1.理论研究:通过查阅国内外相关文献,探讨甲减的中医病名、病因病机、与五脏的关系、中医药治疗方法及右归丸治疗甲减的理论依据,并探讨甲减的流行病学、发病机制、诊断与西医治疗方法。2.实验研究:6周龄SD雄性大鼠32只,随机分为4组,每组8只,即正常组、模型组、优甲乐组、右归丸组。后三组均采用0.1%丙基硫氧嘧啶(PTU)溶液(1 mg/100 g)每天灌胃复制甲减大鼠模型给药,正常组给以等体积蒸馏水,连续4周。采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测甲状腺功能游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺素(TSH)和阳虚指标环磷酸腺苷(c AMP)、环磷酸鸟苷(c GMP),确定甲减阳虚模型是否成功。模型成功后,模型组、优甲乐组、右归丸组继续按相同剂量给药,给药频率改成每两日一次,在此基础上,优甲乐组给予优甲乐溶液(剂量9μg/kg/d),右归丸组给右归丸溶液(剂量2.43 g/kg/d),正常组给予1 ml/100g饮用水,每天灌胃,给药持续6周。治疗6 w后,心脏取血,ELISA法检测甲状腺功能FT3,FT4,TSH,生化法检测肾功能血清肌酐(SCr),尿素氮(BUN);取肾组织作HE染色进行形态学观察,ELISA法检测转化生长因子-β1(TGF-β1),Smad3,I型胶原(Collagen I)蛋白的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾组织TGF-β1,Smad3,Collagen I m RNA的表达。收集数据,采用统计软件SPSS20.0进行统计分析。结果1.甲状腺功能检测:造模4 w后,模型组的FT3、FT4较正常组明显降低,TSH较正常组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。药物治疗6w后,与模型组相比,优甲乐组与右归丸组可上调FT3、FT4水平,下调TSH水平;与优甲乐组比较,右归丸组上调FT3、FT4不如优甲乐组明显,差异具有统计学意义(P<0.01),右归丸组下调TSH不如优甲乐组明显,差异具有统计学意义(P<0.01)。2.阳虚指标检测:造模4 w后,模型组c AMP表达低于正常组(P<0.05),c GMP表达明显高于正常组(P<0.05),c AMP/c GMP比值较正常组显著降低,提示甲减阳虚证大鼠模型复制成功。3.HE染色:光镜下观察HE染色切片,正常组肾小球、肾小管及肾小管间质形态清晰,结构完整,未发现异常。模型组肾间质水肿,伴有大量炎性细胞浸润,肾小球体积增大,大量肾小管上皮细胞坏死及脱落。优甲乐组和右归丸组轻微肾间质水肿,少量炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞脱落现象明显改善。4.肾功能检测:与正常组比较,模型组肌酐与尿素氮水平明显升高;与模型组比较,优甲乐与右归丸明显下调肌酐与尿素氮水平;与优甲乐组比较,右归丸明显下调血清肌酐浓度,无统计学差异(P>0.05),而右归丸下调尿素氮水平不如优甲乐明显,无统计学差异(P>0.05)。5.TGF-β/Smad信号通路蛋白检测:治疗6 w后,模型组大鼠TGF-β1、Samd3、Collagen I蛋白表达增加显著,右归丸可明显抑制TGF-β1、Samd3、Collagen I蛋白表达。6.TGF-β/Smad信号通路基因检测:治疗6 w后,模型组大鼠TGF-β1、Samd3、Collagen I m RNA表达增加显著,右归丸可明显抑制TGF-β1、Samd3、Collagen I m RNA表达。结论1.肾阳亏虚是甲减的基本病机,应用温补肾阳代表方右归丸治疗甲减有效,因此温肾壮阳、滋补精血是甲减治疗的重要法则。2.给予0.1%PTU灌胃后可使大鼠甲状腺功能下降,并出现一系列甲减症状,其证候符合中医阳虚证,提示甲减阳虚证大鼠模型复制成功。3.甲减模型大鼠BUN及Scr水平升高,提示甲减可影响肾功能。4.甲减模型大鼠肾组织中TGF-β1、Smad3、Collagen I基因与蛋白表达均升高,提示甲减肾损伤的发病可能是通过TGF-β/Smad信号通路实现的。5.中药复方右归丸可以有效抑制TGF-β/Smad信号通路中TGF-β1、Smad3、Collagen I基因与蛋白的高表达,由此推测右归丸改善甲减肾损伤的机制可能与其调控TGF-β/Smad信号通路有关。