论文部分内容阅读
背景:近几年来,社会不断发展与进步,人们的饮食结构和生活方式发生了很大改变,前列腺癌(Prostate cancer,PCa)在我国的发病率具有显著的增长。雄激素去势疗法能够有效治疗前列腺癌,并且经过多年的发展和完善已经逐渐成为和外科手术、放射治疗并列的标准前列腺癌治疗方案。然而这种治疗方案在前列腺癌早期应用此治疗方案的有效率约为70%,但当病情缓解期过后,雄激素依赖性的前列腺癌几乎都会进展为去势抵抗性前列腺癌(Castrate-resistant prostate cancer,CRPC),表现为前列腺癌细胞增殖旺盛,伴随着PSA进行性升高,以及前列腺癌骨转移,这使得转变后的治疗更加困难,患者具有极高的死亡率。因此,前列腺癌病情发展到晚期后,现有的标准一线治疗方案便显现出严重的局限性,对去势抵抗性前列腺癌进行有效的治疗成为了我们面临的一个非常重要的难题。肿瘤的发生、发展以及转移、恶化的过程受多方面因素影响,其中,肿瘤细胞赖以生存的微环境与之有着密切相关,这不仅涉及到肿瘤组织自身的结构、生理功能和新陈代谢能力,也涉及到机体中其他组织和细胞,尤其是免疫细胞的分布和状态。近年来,随着免疫学的发展,机体免疫环境的改变,尤其是机体慢性炎症状态与前列腺癌发生发展之间的关系已成为研究重点。研究发现,PCa细胞表达大量促炎症反应趋化因子IL-8,而IL-8可以持续活化细胞内核转录因子NF-κB,从而参与肿瘤耐药的形成。B淋巴细胞在机体免疫应答中具有重要的调控作用,其可以扮演抗原提呈细胞的角色,摄取抗原并对其进行加工,最后提呈给T细胞,介导特异性免疫应答的启动;同时,B细胞能够分泌多种免疫相关的细胞因子、趋化因子,并可以表达一些介导免疫反应的重要膜蛋白,多方面多角度的调控机体的免疫应答。近年来,人们研究发现了Th细胞亚型中一个定位于淋巴滤泡的新成员——滤泡性辅助性T细胞(T follicular helper cells,TFH)。TFH细胞表达CXCR5,其能够在CXCR5特异性配体CXCL13的趋化作用下募集到淋巴滤泡,在淋巴滤泡内通过表达ICOS、PD-1及分泌IL-21等细胞因子参与对B细胞分化、成熟过程的调控,从而介导体液免疫应答。因此,通过研究B细胞各个亚群及B细胞相关TFH细胞各个亚群的组成、分布及行使功能上的差异,将对我们更加全面的认识在前列腺癌中B细胞及TFH细胞扮演的角色,从而为针对前列腺癌进行更有效的免疫治疗提供实验依据和新的方向。目的:研究B细胞及TFH细胞的不同亚型在不同阶段的前列腺癌患者外周血中的表达变化情况及可能的发生机制,针对不同T、B细胞亚群,探讨其在前列腺癌病情发展过程中的功能和调控途径,为以其为基础的免疫治疗方案提供新的方向。方法:经吉林大学中日联谊医院伦理委员会批准,临床收集30例经直肠指检(Digital Rectal Examination,DER)、穿刺活检和前列腺特异抗原(Prostate specific antigen,PSA)筛查确诊的原发前列腺癌患者,并根据前列腺癌临床分期标准将患者分为:A组(≤T1),B组(T2),C组(≥T3),同时收集10名体检健康人的外周血作为对照(Healthy control,HC),通过流式细胞技术检测在不同患者分组中,幼稚性B细胞、记忆性B细胞、成熟B细胞及TFH细胞亚群(TFH1、TFH2、TFH17)的分布情况。通过酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测Ig G1、Ig G2、Ig G3和Ig G4在总Ig G中所占的比例,同时检测IL-4、IL-6、IL-10和PGE2的含量。聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫印迹法(western blot)分别用于检测CXCR3和CCR6在转录和翻译水平的变化。结果:随着前列腺癌疾病的进展,我们发现记忆性B细胞在患者外周血中比例逐渐降低,成熟B细胞在C组中的比例显著升高,而幼稚性B细胞在三组疾病患者中均略有升高,但水平变化不大。Ig G4/Ig G比例在B、C两组中逐渐上升。患者外周血PBMC细胞中,TFH2细胞随着疾病进展逐渐升高,TFH1和TFH17细胞则无明显变化趋势,与疾病进程无关。我们发现,在B细胞与TFH各亚群的体外共培养系统中,是TFH2诱导B细胞的Ig G4在总Ig G中所占比例升高,而在B细胞与总TFH细胞共培养的体系中,Ig G4/Ig G比例能在IL-4、IL-6、IL-10和PGE2的刺激下升高,此过程伴随着TFH2细胞的增多并同时可被抗IL-21抗体阻断。结论:前列腺癌患者外周血中成熟B细胞及其分泌的Ig G4型免疫球蛋白随着疾病的进展逐渐升高,这种B细胞分化异常的状态可能是由TFH细胞亚群中的TFH2亚群比例升高所引起的。深入研究TFH细胞亚群异常分布及其对辅助B细胞生成及分化功能的影响,将对我们以TFH细胞为靶标,为前列腺癌患者进行更有效的治疗新方案提供新的思路和方向。