蛋白质组学研究中高通量、高灵敏度和自动化技术平台的建立一直是该领域中的难点和重点,也是目前的热点领域之一。这不仅给我们提出了巨大的挑战,同时也给我们进行方法学研究提供了良好的机遇。特别是作为人类肝脏蛋白质组计划主席国单位,不仅要领导全世界同行进行科研攻关,为推动该计划的发展做出我们应有的贡献,同时还负有攻克肝病,振兴国家和民族的重大历史责任,这就要求我们要在方法上不断进行创新,克服现有方法上的缺陷,建立一个可靠实用的方法体系,满足蛋白质组学研究的需要,为此我们在蛋白质组研究中多维液相色谱—质谱技术平台的建立方面进行了有益的探索。 毛细管色谱柱是实现复杂体系蛋白质高效分离的关键部件之一,但是商品化的毛细管色谱柱价格昂贵,且存在各种各样的问题,不能满足高通量蛋白质组研究的需要。本实验建立的毛细管色谱柱筛板制备和装填新方法是一种用于毛细管色谱柱筛板制备和装填的简单、快速、高效、成本低并且易于实施的专用方法。该方法可以选择各种规格的毛细管、各种色谱介质,易于实施和操作,适合于装填应用于小分子、生物大分子和多肽等的色谱分离或电色谱分离的各种模式和规格的毛细管色谱柱。该方法已经申请国家发明专利,专利申请号:03121042.2。 在蛋白质组学研究中,多肽混合物的有效分离对蛋白质鉴定和蛋白质之间相互作用的研究起着决定性的作用,但是对复杂的多肽混合物在反相液相色谱中保留行为的研究报道不多。基于此,用反相液相色谱研究了不同长度的色谱柱分离多肽混合物时色谱柱长度对峰容量以及对检测灵敏度的影响,同时考察了梯度时间对峰容量和峰宽的影响。通过实验发现色谱柱长对峰容量和灵敏度有显著影响,而延长梯度时间虽然可以增加峰容量,但会增加峰宽,尽管如此却对质谱鉴定有利。说明对蛋白质组学研究中用毛细管液相色谱-串联质谱联用方法对多肽混合物进行分离鉴定时,采用更长的色谱柱和更长的梯度洗脱时间有利于对更多的多肽进行分析。 严重急性呼吸系统综合征(SARS)给我国人民的生命安全和社会稳定造成巨大威胁,为了探索其发病机理,研制诊断试剂,开发预防疫苗和治疗药物,我们用液相色谱-质谱联用方法对SARS冠状病毒结构蛋白质进行了研究,鉴定出了N、S和M三种SARS结构蛋白质,并准确测定了N蛋白质的分子量。由分子量测定