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目的：构建带有结核分枝杆菌PPE68基因和分枝杆菌复制子OriM基因的穿梭质粒pBudCE4.1/PPE68/OriM，将其电转入BCG，构建PPE68重组BCG，用其免疫BALB／c小鼠，与BCG和DNA疫苗比较，探讨其诱导BALB／c小鼠体内免疫应答特征。方法：以pZM03为模板，用PCR法扩增出分枝杆菌复制子OriM基因，将其亚克隆入已含PPE68基因的带有双启动子的真核共表达载体pBudCE4.1的NheI位点中，经过酶切测序鉴定后，得到穿梭质粒pBudCE4.1/PPE68/OriM；将PPE68基因转染入RAW264.7（小鼠巨噬细胞株），通过RT-PCR和Western-blot检测PPE68的表达。用鉴定正确的穿梭质粒pBudCE4.1/PPE68/OriM电转入BCG中，制备PPE68重组BCG，菌落PCR法进行鉴定，扩增。用鉴定正确的PPE68重组BCG皮内免疫BALB／c小鼠，同时设DNA疫苗组、空载体组、BCG、OriM重组BCG和生理盐水组对照组。于末次免疫后2周，分别检测小鼠体内IgG2a、IL-12、IL-4以及IFN-γ水平；特异性蛋白刺激后淋巴细胞增殖状态；CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞数及CD4+/CD8+比值；观察小鼠肺脾器官荷菌量、组织病理改变情况和免疫组织化学结果。结果：RT-PCR、Western-blot法检测PPE68基因在巨噬细胞内的表达。成功地构建了PPE68重组卡介苗，PPE68重组末次免疫后2周PPE68重组BCG组较BCG组血清IgG2a水平明显升高(P<0．05)；IFN-γ和IL-12水平高于生理盐水组（P>0．05），但低于BCG组和DNA疫苗组(P<0．05)，其中，DNA疫苗组IFN-γ和IL-12水平显著升高(P<0．05);各组产生IL-4水平无显著性差异；特异性脾淋巴细胞增殖明显高于BCG组（P>0．05）；与BCG组和DNA疫苗组相比，PPE68重组BCG组小鼠CD4+T细胞和CD8+T细胞百分比增加，CD4+／CD8+T细胞比值降低；免疫组化法检测到小鼠肺组织中PPE68的表达；肺组织轻度充血程度与BCG组相当，余未见明显病理改变、脾肺无菌落生长。结论：成功构建PPE68重组BCG疫苗，该疫苗可诱导BALB／c小鼠体内IgG2a水平升高，IL-12和IFN-γ含量增加，脾淋巴细胞的增殖明显，CD4+T细胞和CD8+T细胞明显增加，提高机体Th1型免疫效应，为进一步研究其抗MTB的免疫保护作用奠定了基础。